纳米基因药与物.pptVIP

纳米基因药物NANO GENE MEDICINE 朱俊铭 Dec.2009 1.1 基因工程药物 1.2 基因治疗与基因药物 广义：将遗传物质导入人体组织或细胞达到预防和治疗疾病的目的 狭义：对人体遗传物质进行修正、补充或改造来达到治疗疾病的目的 * * Index 1．概述 2．纳米脂质体 3．阳离子聚合物 4．树状大分子 5．病毒载体 1．概述 基因工程药物 基因治疗与基因药物 基因转导方法 非病毒纳米基因载体 Monoclone Antibody Vaccine Therapeutic Protein Interferon Growth Factor Interleukin Solvable Receptor Antisense Gene Human Growth Hormone Tissue Plasminogen Activator Colony Stimulating Factor Erythropoietin Macromolecule Recombinant Carrier Cell Expression Purification Formulation 基因治疗 基因药物——用于基因治疗的药物 1.3 基因转导方法 电穿透、显微注射、基因枪、碳化硅纤维介导 Chemical Physical Biological 磷酸钙沉淀、DEAE介导、聚乙二醇介导、脂质体介导 病毒载体、胚胎干细胞 1.4 非病毒纳米基因载体 阳离子聚合物 脂质体 壳聚糖、多聚赖氨酸、树状大分子 2．纳米脂质体 优势：易降解，毒副作用小，可反复给药 制备简单，重复性好，可大量生产 不激活癌基因，不激活免疫反应 保护药物不被降解 可有效转运，操作简单快速 不足：缺乏靶向性 透膜能力低 在血浆中稳定性差 阳离子纳米脂质体 聚阳离子纳米脂质体 免疫纳米脂质体 中融合纳米脂质体 pH敏感纳米脂质体 长循环纳米脂质体 2.1 阳离子纳米脂质体的组成 1987年，Felgner，DOTMA+DOPE——Lipofectin 阳离子纳米脂质体 —— 阳离子脂质 + 中性辅助脂质 1. 阳离子脂质 2.1 阳离子纳米脂质体的组成 1. 阳离子脂质 2.1 阳离子纳米脂质体的组成 1. 阳离子脂质 2.1 阳离子纳米脂质体的组成 2. 辅助脂质 磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰胆碱(PC)、胆固醇(Chol) 二油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE) 聚赖氨酸(PLL)、硫酸鱼精蛋白(PS) 2.2 阳离子纳米脂质体的结构 小单层纳米脂质体(SUVs) 20~100nm 大单层纳米脂质体(LUVs) 100nm 多层纳米脂质体(MLVs) 300~700nm 少层脂质体 已经商品化的阳离子脂质体 Lipofectin TransfectACE LipofectAMINE (GIBCO BRL) Transfectam TfxTM-50 (Promega) DC-Chol (Sigma) DOTAP (Boehringer Mannheim) 2.2 阳离子纳米脂质体的结构 SUVs or LUVs MLVs 2.3 阳离子纳米脂质体介导基因转移的机制 DNA/脂质体复合物 内吞作用 内体 细胞核 蛋白质 细胞质 治疗作用 1 2 3 4 5 6 2.3 阳离子纳米脂质体介导基因转移的机制 2.3 阳离子纳米脂质体介导基因转移的机制 阳离子纳米脂质体与基因形成复合物 复合物的形成及结构 (2) 复合物的理化性质 SIZE ζ电位 胶体化学稳定性 影响因素——脂质体与DNA浓度 介质的离子强度与温度 样品加入顺序、混合速率 静电模型 内含模型 细面条模型 Radler模型 “蜂窝”模型 2.3 阳离子纳米脂质体介导基因转移的机制 2.3 阳离子纳米脂质体介导基因转移的机制 2. 阳离子纳米脂质体——DNA复合物与细胞外物质的相互作用 相互作用的物质——血液成分（RBC、蛋白质、脂蛋白） 细胞外介质（糖蛋白、CS、胶原） 黏膜分泌物（透明质酸、黏蛋白） 表现——聚集（脂质融合、ζ电位降低、静电排斥力降低） 转