纸层析泛通分析氨基酸.pptVIP

实验二、纸层析法分析氨基酸 一、实验目的 1.掌握纸上层析的一般原理和操作方法。 2.了解氨基酸的特征性颜色反应。 3.学会分析未知样品的氨基酸成分。 二、实验原理 纸上层析法是分配层析法中的一种，常以滤纸为惰性支持物。纸上层析法是分离、鉴定和定量测定氨基酸、糖类、抗生素等有机物质的一项重要而简便的分析方法。所用设备简单、操作方便，使用样品少，分离效果好，为近代生物化学分析中重要技术之一。此法广泛地应用于科研和生产分析工作中。 纸上层析的原理 常以水和有机溶剂作为展层剂；水和有机溶剂互溶后形成两个相：一个是饱和了有机溶剂后的水相, 一个是饱和了水后的有机溶剂相。由于滤纸纤维素上的羟基和水分子有较大的亲和力, 其吸附的水相为固定相, 有机溶剂相为移动相。 由于物质的极性大小不同,在两相中分配比例有所差异。极性小的物质在有机相中分配较多,随有机相移动较快；而极性大的物质在水相中分配较多,移动相对较慢,从而将极性不同的物质分开 在相同的条件下，每种物质都有其固定的Rf值。 Rf值的定义为： 原点到层析斑点中心的距离 Rf = 原点到溶剂前沿的距离 影响Rf值的因素有： ①物质本身的化学结构； ②展层所用溶剂系统； ③展层剂