8第八章 的生殖细胞培养.ppt

第八章 生殖细胞培养 第八章 生殖细胞培养 第一节 花药和花粉的培养 第二节 子房胚珠的培养 第三节 离体受精 第四节 胚培养 第五节 胚乳培养 花药培养是将花粉发育至一定阶段的花药接种到人工培养基上进行培养，以形成花粉胚或愈伤组织进而分化成植株的技术。 花粉培养：是将花粉从花药中分离出来进行离体培养的过程。 2.1.1 花药培养过程： 1）预处理:低温冷藏是最常用的方法 2）表面消毒 3）接种 4）培养形成花粉植株。 花粉---愈伤组织---苗 花粉---胚状体---苗 花药培养脱毒 1974年日本：花药培养可以脱除草莓病毒； 花药采取时期 单核期：花蕾4-6mm，花药1mm 花药诱导愈伤组织培养基 MS+IAA4mg/L+BA2mg/L+KT2mg/L+蔗糖30g+琼脂7g/L 增殖分化培养基 MS+GA1mg/L+IBA0.2mg/L+BA1mg/L+蔗糖30g+琼脂7g/L 生根培养基 1/2MS+IBA0.2mg/L+活性炭3g/L+蔗糖20g+琼脂7g/L 草莓花药愈伤组织,再生植株,花药植株 2.1.2花粉培养 花粉培养成苗途径与花药培养比较: 相同点： 胚状体成苗途径、愈伤组织再分化成苗途径 不同点： 花粉培养： 需进行花粉的分离 特殊的花粉诱导培养 花粉培养过程 2.2 影响花药诱导频率的因素 2.2.1 材料的来源 大田材料比温室的好，因为大田生长的材料一般生长比较健壮，发育好。 光强和日照时数也会影响花药培养效率。 2.2.2 花粉发育阶段的选择 选取花粉处于合适发育期的花药，以便离体培养后能启动花粉发育。 花粉发育时期： 适宜时期：单核期,尤其是单核中、晚期(单核靠边期) 花粉发育时期的检测： 外部形态观察：在水稻中，一般叶枕距为5-15cm，颖片淡黄绿色、雄蕊长度接近颖片长度的1/2时，可能为单核靠边期的花粉。 压片染色法：是检测花粉发育时期的简便有效方法，常用染色剂为醋酸洋红。 烟草花药培养的最适取样期：花粉为单核期的花蕾，此时花蕾的花冠与萼片等长。 芦笋花药培养的最适取样期也是单核期的花粉，花蕾长为2-2.5mm。 镜检确定花粉的发育时期：用醋酸洋红或碘化钾染色，压片镜检，找出花粉发育时期与花蕾或幼穗大小、颜色等特征之间的相应关系。 2.2.4 培养基（1）基本培养基： MS和H培养基：适合双子叶植物花药培养； B5培养基：适合豆科和十字花科花药培养； N6培养基：适合禾谷类作物的花药培养。 我国科学工作者对水稻、小麦的花药培养基做了改进，研制出N6培养基。在N6培养基上，水稻花粉的出愈率大幅度提高。 N6特点：铵离子浓度较低。 2.3 产生花粉植株的两条途径 3 单倍体植株的二倍化 3.1 自发加倍 自发加倍的频率在不同的植株上不同。 烟草自发加倍的频率低，约1%～2%。 水稻自然加倍的频率高达70%以上。 优点：不会出现核畸变， 缺点：加倍频率极低； 3.2 人工加倍 用秋水仙碱处理单倍体可使加倍频率提高。 较大浓度的秋水仙素溶液处理单倍体植株，时间为24-96 h。 浸泡试管苗方法、 处理芽方法、 浸根方法 3.3 从愈伤组织再生 把单倍体植株的茎、叶柄或根的节段，诱导形成愈伤组织， 把这种愈伤组织转移到分化培养基上，在再生植株中将出现许多二倍体植株。 4 花药和花粉培养的应用 ----单倍体植株育种 第八章 生殖细胞培养 第一节 花药和花粉的培养 第二节 子房和胚珠的培养 第三节 离体受精 第四节 胚培养 第五节 胚乳培养 第二节 子房胚珠的培养 1 子房培养 2 胚珠培养 3 影响子房和胚珠培养的因素 4 子房胚珠的培养应用 1 子房培养 定义：子房培养是指将子房从母体上分离出来，在无菌的人工环境条件下培养，使其生长发育形成幼苗的过程。 （1）子房培养的培养过程 1)制备外植体：在开花前后适宜时期取子 房或幼花，消毒 2)子房培养：固体或液体培养均可 性细胞（卵细胞、助细胞、极核、反足细胞）----胚状体或愈伤组织----单倍体植株； 体细胞（珠被、子房壁）---胚状体或愈伤组织----二倍体植株； 第二节 子房胚珠的培养 1 子房培养 2 胚珠培养 3 影响子房和胚珠培养的因素 4 子房胚珠的培养应用 2 胚珠培养 定义：是指将胚珠从母体上分离出来，在无菌的人工环境条件下培养，使其生长发育形成幼苗的过程。 胚珠培养类型： （2）培养基：White,Nitsch,MS 第二节 子房胚珠的培养 1 子房培养 2 胚珠培养 3 影响子房和胚珠培养的因素 4 子房胚珠的培养应用 3 影响子房和胚珠培养的因素 3.1 基因型---品种间的差异 3.2 生理状态---决定于环