无菌检查和微生物限度检查阳性菌种的管理.docxVIP

无菌检查和微生物限度检查阳性菌种的管理实验室要求：实验室环境应清洁、卫生、安静，实验室内严禁吸烟和饮食。 实验人员必须穿戴工作衣帽，工作服经常洗涤、消毒、保持清洁。 操作前后或离开实验室必须用肥皂或消毒液洗手。 发生菌液污染台面或地面，应立即用3%甲醛或5%碳酸等消毒液由外向内倾覆其上，1小时后再擦拭，如为破伤风梭菌，则应隔夜后再擦洗。工作衣、帽、口罩受到菌液污染时，应立即脱下使污染部位包裹在内部，高压灭菌后再清洗。 如有传染性培养物污染手部，应先用75%乙醇棉球擦拭，再浸入01新洁尔灭消毒液内泡手，然后再用肥皂及清水彻底洗干净。 接种环(针)，每次使用前后，必须通过火焰灭菌，冷却后方可接种培养物，接种带有蜡质、油质的培养物或菌苔残留多时，不应立即在火焰上灼烧，应先在内焰里将油质培养物烘干后再移至火焰上灭菌，以免活菌外溅污染环境及感染操作者。 带菌的吸管应浸泡在5%甲酚消毒液内24h后取出清洗，带菌的试管或培养物应在121℃高压灭菌后再取出清洗。 在接种霉菌、放线菌时应在铺有浸过消毒液的纱布上操作，防止孢子散落传播。凡带活菌的物品，必须消毒后才能清洗，严禁污染下水道。 二、无菌操作要求: 无菌操作是指在无菌的环境条件下，使用无菌器材，防止微生物污染的操作技术。即保持待检样品在操作时不被污染，又要防止被检的微生物及阳性对照菌在操作中污染环境或感染操作人员。从事无菌及微生物操作的工作人员必须经过无菌技术及基础微生物学专业知识的学习及培训才具备上岗操作的资格，微生物专业检验人员也不应该频繁地变换工作岗位。 无菌室应每次使用前后用0.1%新洁尔灭消毒液或2%甲醛液擦拭工作台面及可能污染的死角，湿拖地面，打开无菌空气过滤器及超净工作台的开关30分钟，紫外线杀菌灯照射1小时。操作人员用肥皂洗手后进入缓冲间换拖鞋，用75%乙醇棉球擦手，穿戴工作衣帽、口罩。将所需物品剥去牛皮纸及外包装，从传递窗移入操作间，再用01新洁尔灭泡手后进入操作间，在乙醇(或煤气灯)火焰区(火焰高度3-5cm)操作。供试品表面消毒，如为安瓿先用砂轮划痕后用2%碘酒棉球擦拭，再用75%乙醇棉球擦拭、待干，也可以用消毒液浸泡消毒。 操作者勿用嘴直接吸吹吸管，防止致病菌感染操作人员及口中的杂菌污染供试品。在无菌操作中切勿大幅度或快速动作、拖行，以免搅动空气中尘埃微粒。注射器如需回抽时，应对着火焰吸入无菌空气。 所用的器材如培养基、稀释剂配制后经湿热灭菌121℃20分钟，吸管培养皿等均应洗涤，干燥，包扎后经干热灭菌160℃2小时才能使用。三、仪器设备 实验室所用的各种仪器，如培养箱、电热恒温水浴瓶、电热恒温干燥箱等，均应严格按照仪器说明书操作，均应按计量要求定期检测，并做好检测与维修记录，以保证其正常使用。无菌操作净化工作台要定期检测洁净度，应达到百级。净化工作台的高效过滤器应根据使用情况四、培养基的管理 培养基是人工配制的适合细菌生长繁殖的生物营养物质，培养基的管理在无菌及微生物限度检查工作中起着重要的作用。 1.培养基购入后应记录名称、产地、批号，培养基配制记录应包括:名称、配制量、配制者、配制日期。 2.干燥培养基的配制应先量入蒸馏水至容器中，再称取培养基干粉放入水中，摇匀，静置15分钟使其溶解，一般不要加热，避免某些营养成分被破坏。 3.培养基配制后应立即灭菌，以防长菌使营养成分损耗，高压灭菌时应防止温度过高、时间过长，使营养成分破坏致使实验结果出现假阴性。灭菌时间:稀释剂121℃灭菌20分钟，含糖培养基115℃灭菌20分钟。 4.配制好的培养基应保存在凉暗处(2-10℃)或置4℃冰箱内保存，一月左右使用。保存时间需视培养基中水分蒸发程度及有无污染而定，用硅胶塞，封入塑料袋，内可延长保存时间。培养基切勿反复加热使用。 5培养基的质量控制，应选用优质的蛋白胨，牛肉膏等营养成分，化学纯以上的化学试剂，调配成最适的pH值。配制后应按规定做无菌试验，如无菌检查用的培养基，需气菌、厌气菌培养基置30-35℃培养48小时，真菌培养基置20-25℃培养72小时，应无菌生长。除此以外，还需做培养基性能的质量控制，性能试验:即不同的培养基接种不同的已知标准菌株，培养24小时后，观察细菌生长情况，如无菌检查培养基需做培养基灵敏度试验，细菌生长良好，说明培养基性能可靠。五、实验菌种的保藏与管理 国内药品微生物检验所用的菌种菌号是CMCCB、CMCCF，B(Bacteria)代表细菌，FFungi代表真菌。由中国药品生物制品检定所提供。 1.菌种保藏基本要求 菌种的保藏是微生物学基础工作中的一项重要内容，用人工方法低温、干燥、缺氧、缺营养等方法控制微生物的代谢，使细胞基本上处于休眠状态，繁殖受到抑制仍保持菌种原有的各种生物学特性，以达到保种的目的。菌种保藏的关键