实验四类风湿因子检测.ppt

实验四 类风湿因子的检测 类风湿因子的检测 类风湿因子（RF）是一种抗人或动物IgG分子Fc片段抗原决定簇的抗体，是以变性IgG为靶抗原的自身抗体。RF最初由Rose等（1984年）在类风湿性关节炎（RA）患者血清中发现。RA患者体内有产生RF的B细胞克隆，在变性IgG或EB病毒的直接作用下可大量合成RF。RF主要为19S的IgM，也有7S的IgG和IgA，它与天然IgG结合的能力较差，最易与人和动物的变性IgG或免疫复合物中的IgG结合。 RF与体内变性的IgG结合形成免疫复合物后可活化补体，或被吞噬细胞吞噬。由吞噬细胞释放的溶酶体酶、活化肽、胶原酶、前列腺素E2等物质，在细胞因子和炎性粘附分子的参与下，致组织炎性损伤，可使患者发生骨关节炎及血管炎。 类风湿性关节炎 类风湿关节炎( RA)： 其病因及发病机制仍不完全明了, 推测可能为外源性感染作用于遗传易感个体, 导致机体免疫系统紊乱, 进而引起关节滑膜、软骨组织慢性炎症和破坏的自身免疫性疾病。 RF在RA患者中的阳性检出率很高，可达79.6%，是RA患者血清中常见的自身抗体。高滴度RF阳性支持对早期RA的诊断，在RA患者，RF的滴度与患者的临床表现呈正相关，即随症状加重而效价升高。但RF不是仅在RA患者中出现，在SLE、进行性全身性硬化症等自身免疫性疾病患者和部分老年人中RF的阳性率可达28.9%～50%。因而RF对RA患者并不具有严格特异性，RF阳性不能作为诊断RA的惟一标准。尽管在多种疾病中可有RF阳性，但滴均较低（＜40IU/ml），随着RF滴度增加，RF对RA的诊断特异性增高。 类风湿因子的病理作用（一） 类风湿性血管炎，在外周血液循环中，类风湿性关节炎特异性RF与自身IgG分子结合形成稳定的免疫复合物，部分被单核-吞噬细胞系统清除，部分沉积于血管壁，激活补体导致血管炎。 类风湿因子的病理作用（二） 关节型损伤由于类风湿关节滑液中缺少正常的IgG分子，IgG-RF自身结合形成多聚体复合物，IgG-RF多聚体沉积于关节表面激活补体引起关节性损伤。 常见的RF有IgM型、IgG型、IgA型和IgE型，其中IgM和IgA类风湿因子易于检测，而IgG类风湿因子难于测出。IgA类风湿因子及IgM类风湿因子对类风湿关节炎诊断有较好的参考价值。 IgM型RF：在RA患者血清中IgM型RF效价＞80IU/ml并伴有严重关节功能障碍时，通常提示患者预后不良。 IgG型RF：在RA患者血清或滑膜液中IgG型RF的出现与患者的滑膜炎、血管炎和关节的症状密切相关，此类RF常伴随高滴度的IgM型RF在同一RA患者血清或滑膜液中出现。在正常人及非RA患者中很难检测出IgG型RF．IgG型RF在关节软骨表面的沉积可激活补体引起关节的炎性损伤，因此滑膜液中检测出IgG型RF比血清中检出IgM型RF更具病理意义。 RF检测方法一般有胶乳凝集试验、双抗原夹心ELISA法、速率散射比浊法 。 一般医院主要采用胶乳凝集法和酶联免疫吸附法测定类风湿因子。 类风湿因子的检测 类风湿因子的主要类型： IgM型 特点：高凝集、易于沉淀 测定方法为： 1、乳胶凝集法 2、酶联免疫吸附法 3 、乳胶免疫比浊法 胶乳凝集试验检测RF 概念：颗粒性抗原与相应抗体，或表面包被抗原（抗体）的颗粒状物质与相应的抗体（抗原）在电解质存在的条件下相互结合，出现肉眼可见的凝集团现象。 正向间接凝集试验—测RF 原理（胶乳凝集试验） 类风湿因子（RF）是一组抗变性IgG的自身抗体，它能与人或动物的变性IgG结合，而不与正常人IgG发生凝集反应。 将处理过的人IgG与胶乳颗粒共价交联，使其吸附于胶乳颗粒载体上，称为致敏胶乳颗粒。当待检血清中有RF时，则与致敏胶乳颗粒上的变性IgG发生反应，出现凝集现象。 主要的试剂和器材 类风湿胶乳诊断试剂 RF阴性对照 RF阳性对照 反应板 搅拌棒 操作步骤 （1）在3块载玻片上分别加一滴RF阳性血清、RF阴性血清及待检血清。 （2）加20ul IgG致敏的胶乳于各血清样品中，轻微晃动载玻片混匀。 （3）1 min 后观察凝集反应发生情况 结果观察和判断 在室内的光线下观察，有清晰的凝集颗粒出现，且液体澄清者为RF阳性。 若需做半定量测定，可将血清作倍比稀释，重复上述测定，以出现凝集的血清最高稀释度为RF的效价（滴度）。 注意事项 （1）器材要洁净、血清要新鲜、以确保结果可靠 （2）注意阴性、阳性对照的设立 （3）注意血清及致敏胶乳加样量的比例 直接凝集试验（玻片法）--测ABO血型 原理 天然的颗粒性抗原（如细胞、细菌等）与相应抗体在适宜条件下反应，出现肉眼可见的凝集物，称为直接凝集反应。 玻片法属于定性试验。 主要的试剂和器材 抗A血型定型试剂