5现代色谱分析-毛细管电泳.pptVIP

毛细管电泳中的紫外检测，由于毛细管内径系，光程短，导致吸光度值低，因此对检测器灵敏度要求较高 * * 扩大光程，将毛细管折成Z字形，但不能太长，太长不利于分离；泡状检测窗；涂上高反射涂层 商品化的有：Z字形，泡状。 如果样品浓度不是很低，可以直接使用普通的毛细管。只有在样品浓度极低的情况下，才选择这些特殊的毛细管。但一般由于这些毛细管到货不及时，可能会在样品前处理时想些办法，以使用普通的毛细管 * * 激光诱导荧光价格比较贵，检测器的报价在6万多美元，最后的成交价在4万美元左右 紫外和激发诱导荧光检测器的商品化应用较为广泛，其他的检测器有，但应用不广泛 * 商品化的不多，老师说目前他还没有看到过，实验室里有自己设计的 * 背景电解质中加入有紫外吸收的物质。加入没有紫外吸收的样品后，就会出现倒峰，以此解决没有紫外吸收的物质，而我的检测器又只有紫外的情况下使用 * 电压越高，分离度越好，但是电压高到一定程度后，可能分离度不变或下降。因此，在仪器允许范围内，寻找合适的电压 * 对重现性的影响较大。对于蛋白质分离，温度一般地一些，但也要看具体情况。通过实验优化温度 * 内径，选择余地不大，如果有特殊要求，可以定制加工。长度在60~70cm的较多。有效长度指进样口到检测器。 * 小分子物质的分离，使用普通的毛细管就可以了 * 空管用请氢氧化钠清洗后，再水洗，再盐酸清洗…… * * * 缓冲试剂的浓度高，产生的焦耳热大，扩散严重。 * 毛细管电泳应用非常广泛 * * 空心毛细管。毛细管电泳中所用的毛细管长度最多不超过一米。所有色谱方法中，毛细管电泳的柱效是最高的 * * 进样量是nL级别的，因此所需样品量比较少。 迁移时间在几分钟之内漂移时比较正常的 * MEKC也有的地方简称是MECC * * 电渗流的产生是因为毛细管壁带负电荷，可以吸引带正电荷的粒子，形成双电层，一层是紧密层（固定不动的），一层是扩散层。加电压后，扩散层带正电荷，向负极移动，同时会将溶剂带着向负极移动。这就是电渗流。电渗流的速度大于电泳流。粒子的移动速度是电渗流和电泳流的矢量和。流动相均是电解质溶液，可能会加入一些有机改性剂，如甲醇，乙腈等，但一般都不添加有机改性剂 * 在毛细管区带电泳的缓冲液中添加离子型表面活性剂，十二烷基磺酸钠或十二烷基硫酸钠 * 胶束可以看成HPLC中的固定相，但又不是实际意义上的固定相，因此也叫假相。由于粒子与胶束的作用能力不同而达到分离，一般用于分离中性化合物。（其他毛细管电泳的模式无法分离中性物质，胶束电动色谱扩展了毛细管电泳的应用范围） * 两种作用，电泳的作用，凝胶的作用。电泳和凝胶色谱的结合。分离能力更高。 * 部分凝胶电泳中，通过对毛细管壁的处理，可以消除电渗流的作用 * * * 前导电解质的电泳速度比较快，终结电解质的迁移速度慢。 * 蛋白质在等电点时是不带电荷的，利用这一特性达到分离 * 加压后，在毛细管内形成了pH值的梯度。样品在该毛细管内，如果蛋白质运行到自己的等电点处，由于不带电而不移动。完成分离后，加压让所有待测物流出毛细管；另一个办法是将两端的缓冲液都换成NaOH，让样品流出 * CEC，也叫电动毛细管色谱。CEC里的毛细管装填的就是液相色谱中的固定相，然后按电泳的方法，加压进行分离，分离原理有两种：电泳作用，通过质荷比而达到分离；第二种就是待测样品与固定相发生分配作用而达到分离。两者作用加和，分离效果更好。HPLC中有泵，但CEC是通过加压，产生电渗流而达到推动样品前进的作用力。CEC中的柱子是比较短的，柱长一般是20~30cm * CEC的柱效较HPLC的高 * * 电渗流的流动是平头峰，扩散较少。HPLC是抛物线的形状，容易引起扩散。这是CEC柱效比HPLC高的一个重要原因 有些HPLC柱子是塑料的。考虑到柱子是不锈钢的，装填填料的时候，由于不锈钢较硬，可能会使填料装填时有空隙，从而产生流体流动的 抛物线形状。改用塑料，可能可以改善这一情况。但是塑料不耐压，因此又在塑料外加不锈钢，且在塑料和不锈钢之间加压。但这种柱在90年代热锅一阵，现在不多见了 * * 经过涂层处理，可以降低甚至消除电渗流的作用 * * 分子扩散在毛细管电泳中，属于影响较小的因素。 * 毛细管中间温度最高。毛细管内壁和外壁的温度是差不多的，但离开毛细管后，温度下降较快。温度在毛细管内呈现抛物线的形状，从而导致峰的扩散 * * 背景电解质的电导率的差异引起扩散 * 毛细管壁的硅羟基的吸附作用。要分离大分子物质，一般要对毛细管进行涂层处理 * GC中进样后，由于衬管的存在，死体积比较大。液相进样后，由于管路连接进入色谱柱，也存在死体积。CE的进样器中不能存在死体积，因为毛细管柱体积较小。 温控有液冷和气冷。Agilent有气冷；贝克曼采用的是液