实验6 组织DNA与RN接A的分离和提纯.pptVIP

组织DNA与RNA的分离和提纯 原理 在浓氯化钠（1-2M）溶液中， DNP 的溶解度很大， RNP 的溶解度很小 在稀氯化钠（0.14M）溶液中， DNP 的溶解度很小， RNP 的溶解度很大 0.14MNaCl-0.01MEDTA溶解RNP,而使DNP沉淀 核蛋白用SDS（十二烷基磺酸钠）处理，DNA（或RNA）即与蛋白质分开 氯仿-异戊醇将蛋白质沉淀除去, DNA溶解于溶液 防止DNA（或RNA）酶解，提取时加EDTA 乙醇使DNA析出 热酚法 利用高温下SDS和酚使蛋白强烈变性同时抑制RNase活性来迅速提取RNA 醋酸缓冲液细胞破碎 匀浆等体积90％苯酚水溶液振荡 RNA、Pro分开 RNA、多糖（水层）； DNA、Pro（苯酚层） RNA提取的准备工作------ 抑制或灭活RNase RNA分离的最关键因素是尽量减少RNA酶的污染。 RNA酶含有肽链内二硫键，使其能抵抗长时间的煮沸和温和变性剂，变性后可迅速折叠，具有很高的稳定性。 酶活性的不依赖二价阳离子激活，难以被金属离子鳌和剂（EDTA）失活 RNA酶可耐受多种处理(例如煮沸、酸、碱)而 不失活 存在广泛，环境中灰尘、各种实验器皿和试剂、人体的汗液和及唾液中均存在RNA酶 抑制RNA酶活性的试剂常用的有焦碳酸二乙酯（DEPC），异硫氰酸胍(GIT)， RNA酶抑制蛋白（RNasin），皂土及复合硅酸盐等 D