实验一、载体类型解析与质粒DNA的提取、分离和纯化.pptVIP

实验一、质粒DNA的提取、分离和纯化 1、质粒与载体的基本知识 载体（vector）: 把一个有用的目的DNA片段通过重组 DNA 技术，送进受体细胞中去进行繁殖和表达的工具。 载体的基本类型： 质粒（plasmid）：重组DNA技术中最常见的载体。 ?噬菌体（? phage）： Cosmid： BAC (bacterial artificial chromosome) YAC (yeast artificial chromosome) 其它 质粒的基本性质： 质粒是一种染色体外的稳定遗传因子，大小从1-200kb不等，为双链、共价闭合环状DNA分子cccDNA，并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中，它具有自主的复制和转录系统，但质粒的复制和转录需要宿主细胞编码的某些酶和蛋白质。此外，质粒还具有编码某些酶的基因，如对抗生素的抗性等。 质粒在细胞内的复制一般有二种：紧密控制型（stringent control）和松弛控制型（relaxed control）。前者只在细胞周期的一定阶段进行复制，通常每个细胞内只含有一个或几个质粒分子；后者在整个细胞周期中随时可以复制，在每个细胞中有许多拷贝，一般在20个以上。在细胞培养过程中，加适当氯霉素可使松弛型质粒的拷贝数由原来的