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虎杖苷在大鼠体内的药动学特点和组织分布研究 虎杖苷 (3, 4′,5-三羟基二苯乙烯-3-O-β-D-葡萄糖苷)是从蓼科植物虎杖提取物（Rhizoma Et Radix Polygoni Cuspidati）中分离得到的多羟基类化合物，近年研究表明，虎杖苷在防止动脉内皮损伤性血栓形成，改善休克微循环，提高休克大鼠存活率，减轻缺血-再灌注、自由基、内毒素等造成的组织器官损伤等诸方面有良好作用。 1. 概 述 1. 概 述 试验目的 分离提取虎杖有效部位，研究灌胃给药后虎杖苷在大鼠体内的药动学特点和不同组织的分布情况。 2. 试验方法 2.1 色谱条件 色谱柱：Diamonsil C18柱（250mm×4.6mm，5μm） 流动相：乙腈-水（26:74） 流 量：1.0mL/min 检测波长：303nm 2. 试验方法 2.2 对照品溶液的配制 精密称取虎杖苷对照品适量，加甲醇溶解，配成质量浓度为 60.625μg/mL的标准储备液。按倍比稀释法配成一系列质量浓度 (12.125、6.063、 1.213、1.010、 0.758、0.606、 0.303、 0.152、 0.076μg/mL）的甲醇溶液。 2.3 虎杖苷有效部位制备 虎杖苷粉末 50%乙醇回流提取，并浓缩 1﹕2水溶液 乙酸乙酯萃取 NaOH调节pH7.8 提取物 硅胶柱，氯仿-甲醇（50﹕10）洗脱 有效部位（77.25%） 2. 试验方法 2.5 生物样本的制备 2.5.1 血样的制备 雄性 SD 大鼠（体重170~200g） 6 只，给药前禁 食12 h，自由饮水。大鼠 ig 虎杖有效部位（3mg/mL虎杖苷混悬液），给药剂量为 50mg/kg (以虎杖苷计)，给药后，分别于 5、10、 15、25、30、 45、60、 120、150、180、240min 从大鼠眼底静脉丛取血 0.3mL，置1mL 肝素化的离心管中，以 10000 r/min离心 10min，取血浆于-20 ℃冷冻保存，待测。 2. 试验方法 2.5.2 组织样品的制备 雄性SD 大鼠18只，随机分为3 组，每组 6只。给药前禁食 12 h，自由饮水。大鼠ig 给予虎杖有效部位，给药剂量为 50mg/kg (以虎杖苷计) ，分别于吸收相 (10min)、分布相 (30min) 和消除相 (120min) 各断头处死6只大鼠（以上时间点根据其血药浓度-时间曲线确定），立即取出心、肝、脾、肺、肾、胃、小肠、睾丸、脑，除小肠和胃剪开除去内容物后用生理盐水清洗外，其余器官用生理盐水洗净表面浮血，置-20 ℃冷冻保存。测定前取出组织样本，解冻，称质量，剪碎，加2倍量生理盐水在冰浴中制成匀浆。 2. 试验方法 2.6 生物样品的测定 取经处理的生物样本0.1mL，置于1.5mL离心管中，加入甲醇0.3mL沉淀蛋白，涡旋30s，10000r/min离心10min，取上清液20μL进样，测定。 3. 试验结果 3.1 方法专属性考察 图1. 空白血浆(A)、空白血浆加虎杖苷对照品(B)和血浆样品色谱图(C) 3. 试验结果 3.2 标准曲线的制备 取空白生物样本各0.1mL，置1mL离心管中，加入虎杖苷对照品溶液，分别制成系列质量浓度的样本，进行样品处理和测定。以虎杖苷在生物样本中的质量浓度 (μg/mL) 为横坐标，峰面积为纵坐标求得方程。 分别为： 血浆：Y=5.876 ×10-5X-0.0098，r=0.9994 心脏：Y=5.282 ×10-5X-0.0368，r=0.9995 肝脏：Y=5.608 ×10-5X-0.0028，r=0.9988 脾脏：Y=4.974 ×10-5X-0.0848，r=0.9993 肺：Y=5.009 ×10-5X-0.0726，r=0.9975 肾脏：Y=5.421 ×10-5X-0.0222，r=0.9954 胃：Y=5.480 ×10-5X-0.0066，r=0.9967 小肠：Y=5.552 ×10-5X-0.0044，r=0.9993 睾丸：Y=5.532 ×10-5X-0.0057，r=0.9976 脑：Y=5.216 ×10-5X-0.0418，r=0.9998 3.4 药动学研究结果 大鼠ig给予虎杖有效部位后，血药浓度-时间曲线经拟合后，发现大鼠以50mg/kg ig给予虎杖有效部位后，虎杖苷在大鼠体内的药动学行为符合二室开放模型。 参数 单位 Mean±s V L·kg-1 20.24±5.92 t1/2(β) min 89.84±27.52 AUC μg·min·mL-1 126.80±34.16 CL L·kg-1·min-1 0.42±0