猪粪便污染特异性分子标记筛选及其pcr检测方法的-环境科学学报.pdfVIP

第 ３７ 卷第 ６ 期 环　 境　 科　 学　 学　 报 Ｖｏｌ.３７ꎬＮｏ.６ ２０１７年６月 　Ａｃｔａ Ｓｃｉｅｎｔｉａｅ Ｃｉｒｃｕｍｓｔａｎｔｉａｅ Ｊｕｎ.ꎬ２０１７ ＤＯＩ:１０.１３６７１/ｊ.ｈｊｋｘｘｂ.２０１６.０３９５ 樊丽华ꎬ帅江冰ꎬ莫虹斐ꎬ等.２０１７.猪粪便污染特异性分子标记筛选及其ＰＣＲ检测方法的建立[Ｊ].环境科学学报ꎬ３７(６):２０８５￣２０９１ Ｆａｎ Ｌ ＨꎬＳｈｕａｉＪ ＢꎬＭｏ Ｈ Ｆꎬｅｔ ａｌ. ２０１７.Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ ＰＣＲ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｓｗｉｎｅ ｆｅｃｅｓ ｐｏｌｌｕｔｉｏｎ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｓｗｉｎｅ￣ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｇｅｎｅｔｉｃ ｍａｒｋｅｒｓ [Ｊ].Ａｃｔａ Ｓｃｉｅｎｔｉａｅ Ｃｉｒｃｕｍｓｔａｎｔｉａｅꎬ３７(６):２０８５￣２０９１ 猪粪便污染特异性分子标记筛选及其ＰＣＲ 检测方法 的建立 ２ １ꎬ∗ １ １ １ １ꎬ∗ ２ １ 樊丽华 ꎬ帅江冰 ꎬ莫虹斐 ꎬ曾若雪 ꎬ金晨晨 ꎬ张晓峰 ꎬ陈青 ꎬ何永强 １. 浙江省检验检疫科学技术研究院ꎬ杭州３１００１６ ２. 浙江工商大学食品与生物工程学院ꎬ杭州３１００３５ 收稿日期:２０１６￣０９￣２３　 　 　 修回日期:２０１６￣１０￣１４　 　 　 录用日期:２０１６￣１０￣１９ 摘要:肠道微生物群落在与其宿主长期协同进化过程中会形成大量的宿主￣肠道微生物互作基因ꎬ这些互作基因具有一定的宿主肠道微生物特 异性ꎬ利用其设计分子标记能有效识别粪便污染源.本研究首次利用竞争性杂交的方法富集猪粪便特异性基因ꎬ从中筛选出具有猪粪便特异性 的基因片段ꎬ以此设计引物并建立相应的ＰＣＲ检测方法ꎬ并对采集样进行应用调查.竞争性杂交富集的猪粪便特异性基因文库以拟杆菌群 (Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ)(４３.２％)和梭状杆菌群(Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａ)(１９.５％)相似序列为主ꎬ其蛋白功能主要分为３大类:与信息贮存与加工有关(７.６％)ꎬ与细胞 加工及信息传导有关(１２.８％)以及与代谢有关(２２.０％).进一步针对功能蛋白序列筛选宿主粪便特异性分子标记.分析表明序列３￣５３￣２对应引 －１ 物可作为猪粪便污染的特异性分子标记ꎬ针对其建立的常规ＰＣＲ方法对粪便ＤＮＡ 的检出限可低至０.０１ｎｇμＬ ꎬ且对实际样品具有较高的应 用灵敏性(９７％)和特异性.进一步对可能受污染水样进行猪粪便污染特异性检测ꎬ结果显示不同地区的阳性检出率高达７５％~１００％ꎬ证明了此 方法的有效性ꎬ可为研究微生物示踪技术在非点源污染方面的应用提供一定的基础数据. 关键词:竞争性杂交ꎻ宿主￣微生物互作基因ꎻ宿主粪便特异性分子标记ꎻ常规ＰＣＲ 文章编号:０２５３￣２４６８(２０１７)０６￣２０８５￣０７　 　 　 中图分类号:Ｘ１７２　 　 　 文献标识码:Ａ Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ ＰＣＲ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｓｗｉｎｅ ｆｅｃｅｓ ｐｏｌｌｕｔｉｏｎ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｓｗｉｎｅ￣ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｇｅｎｅｔｉｃ ｍａｒｋｅｒｓ ２ １ꎬ∗ １ １ １ １ꎬ∗ ＦＡＮ Ｌｉｈｕａ ꎬＳＨＵＡＩ Ｊｉａｎｇｂｉｎｇ ꎬＭＯ Ｈｏｎｇｆｅｉ ꎬＺＥＮＧ Ｒｕｏｘｕｅ ꎬＪＩＮ Ｃｈｅｎｃｈｅｎ ꎬＺＨＡＮＧＸｉａｏｆｅｎｇ ꎬＣＨＥＮ ２ １ Ｑｉｎｇ ꎬＨＥ Ｙｏｎｇｑｉａｎｇ １.