第二章节 有效成分分析—经典方法 2.pptVIP

第二章 有效成分分析—经典方法 常用农药分析方法： 化学法、光谱法和色谱法 需前处理——经典方法 （前处理+经典方法） 第二章 有效成分分析—经典方法 第一节 薄层色谱法 第二节 重量分析法 第三节 滴定分析法 第四节 紫外-可见分光光度法 第一节 薄层色谱法 前处理目的 常用前处理方法：挥发、液液分配和薄层色谱法 农药中杂质： （1）原药中杂质：有效成分异构体、原料和中间产物； （2）制剂中杂质：大多为助剂，含量大，与有效成分性质差异大。 但原药中的异构体分离较难。 一、薄层色谱概述 1938年，俄国人，氧化铝薄层，天然药物； 1965年，德国化学家，《薄层色谱法》，推动了此技术的发展； 70年代中后期，高效薄层色谱（HPTCL）； 80年代以后，薄层色谱光密度扫描仪，各步操作实现仪器化、计算机化。 分离与纯化：农药原药或制剂（混合物），与其他方法结合使用。 定性和半定量：设备简单，分析速度快，分离效率高，结果直观；其分离容量及效果不如柱色谱。 普通薄层色谱基本整套工具配置 薄层色谱（自动）仪器 自动点样仪 全自动展开仪 数码成像系统 薄层色谱扫描仪 分离各种染料的薄层色谱图 二、吸附薄层色谱法原理 利用样本中各组分的理化性质不同，它们在吸附剂（或固定相）上被吸附或解吸的作用力大小不同； 各组分在随展开剂由原点向预定的前沿移动时，在两相间反复进行吸附和解吸的过程，吸附强的成分难于被展开剂解吸下来，移动速度较小，吸附弱的成分较易被展开剂解吸附，移动速度大； 移动速度的差别，使各成分达到分离。 三、薄层色谱操作技术 制板、活化、点样、展开、显色、定性、溶出（洗脱） （1）薄层材料 a.玻璃板 b.吸附剂：硅胶、氧化铝 硅胶，弱酸性，分离酸性和中性物质； 氧化铝，弱碱性，分离碱性和中性物质。 可用稀碱水或稀酸水改变原来的酸碱性。 1、制 板薄层质量的优劣是分离测定成败的关键。 c.黏结剂 无机黏结剂 石膏（硫酸钙, 13%）， “G”、“H”。 优点：耐高温，耐酸碱，但易凝固。薄层强度差，易碎。 有机黏结剂 羧甲基纤维素钠（CMC，0.5%~1%）、淀粉（5%）、煅石膏（10%~20%）等。 其特点是薄层强度高、使用方便，但不能用浓硫酸等腐蚀性物质做显色剂。 d.荧光指示剂 以“F”表示。 例：硅胶HF254 、GF254 （2）薄层板的制备 例：涂布CMC硅胶板（粒度10～40um）： 称取10 ~15克硅胶，放入小研钵内，加CMC水溶液（20 ~ 30mL，0.5 ~1%），迅速搅拌； 把吸附剂糊状物直接倒在玻璃板上，轻轻敲打，使糊状物均匀分布在玻璃板上，厚度约在 0.5 ~ 0.8cm； 将涂好的板自然风干后进行活化处理。 2、薄层板活化 涂布后的薄层先在室温下阴干，在使用前置适当温度烘烤一定时间进行活化，然后置干燥器中备用。 硅胶 110℃ 1 h 氧化铝 110℃ 30min 3、点样 （1）点样器 1）微量注射器 2）毛细管 直径＜1mm，管口平齐的毛细管 （2）点样方式 a. 手工点样; b. 自动点样 端口平齐、垂直，避免划伤薄层固定相 药典规定：基线距底边2.0cm, 两端各留1~1.5cm，样点d=2~4mm, 点间距为1.5~2.0cm。 （3）点样量 与薄层的厚薄、性能、显色剂的灵敏度有关。 具体由预试确定，一般： 圆点：几 ~ 几十 ug, 尽量小 带状：可达mg，细直 4、展开 流动相沿薄层板从原点移向前沿的过程。 展开距离一般为10~15cm。 上行展开、多次展开、二维展开 （1）上行展开 （2）多次展开 用不同极性溶剂展开 （3）二维展开 在两个垂直的方向上进行展开。 5、显色（定位） 对待测成分的确认和检出 （1）紫外光下显色 1）直接显色 2）荧光淬灭：GF254 （2）碘 与化合物发生物理吸附作用，呈现淡黄棕色。 （3）氯化钯 含硫农药 0.1g氯化钯，溶解于5ml 0.1ml/L硫酸中，加水100ml 放置后，直接喷洒于薄层板上即可。谱带呈黄棕色。 6、定性 影响Rf值的因素： 吸附剂的性质和质量、吸附剂的活性、展开槽的饱和程度、边缘效应。 边缘效应：同一样品，点在薄层板中部和边缘处时，Rf值不同，特别是用低沸点混合展开剂（如氯仿、甲醇混合物等）时更明显的现象。 7、溶出（洗脱） 将农药有效成分的条带刮下来，选