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第二章 植物化学成分的研究程序 有效成分化学结构的研究方法 Content 研究对象的确定 文献资料查阅和信息收集 植物化学成分的预实验 植物化学成分的提取、分离、纯化和结构鉴定 植物化学成分的结构改造和构效关系 第一节 研究对象的确定 依据： 古代医学典籍、民族医学资料或民间经验 当地植物样品随机抽取 植物化学分类学知识 植物化学成分信息 偶然的信息和意外的发现 检索工具（internet） 第二节 文献资料查阅和信息收集 主要专著和教科书 主要工具书和检索工具 期刊杂志 网上查阅文献资料(文献查阅网站、专利） 其他有用信息 第三节 植物化学成分的预实验 在分离活性成分前，先用几种不同极性的溶剂分别进行提取，进行生物活性筛选，确定哪一个溶剂提取部位有效后，再对该部位进行各类化学成分的预试验，从而缩小预实验的范围。 预试验的要求： 1. 预试验之前，了解植物的产地、生物学特性和分类学鉴定，以及借助外观、色、嗅、味等对植物样品所含成分作初步观察，以提供进一步检查的参考。 如：甜味 可能含糖类 苷类 味酸 可能含柠檬酸 苹果酸等羟基酸 味苦 可能含有生物碱 苷类 苦味质 2. 简便快捷且尽量正确 一般试管试验 也可用纸片法 纸色谱或薄层色谱 预试验主要分两类： 一、单向预试法 仅为了测定某一特定成分。主要用水提取液、醇提取液和石油醚提取液来进行某类成分的检验。 二、系统预试法 对植物中的各类成分进行比较全面的定性检查。常用递增极性的方法，依次用石油醚、乙醚、乙醇和水等进行抽提。 植物的化学成分较复杂，有些成分是植物所共有的，如纤维素、蛋白质、油脂、淀粉、糖类、色素等。有些成分仅是某些植物所特有的，如生物碱类、甙类、挥发油、有机酸、鞣质等。 各类化学成分均具有一定的特性，一般可由植物的外观、色、嗅、味等作为初步检查判断的手段之一。 如植物样品折断后，断面不油点或挤压后有油迹者，多含油脂或挥发油； 有粉层的多含淀粉、糖类； 嗅之有特殊气味者，大多含有挥发油、香豆精、内酯； 有甜味者多含糖类；味苦者大多含生物碱、甙类、苦味质；味酸者含有有机酸；味涩者多含有鞣质等等。 一、 ? 预试溶液的制备1、 ? 水提取液——糖、多糖、有机酸、皂苷、酚类、鞣质、氨基酸、多肽、蛋白质 2、 ? 乙醇提取液——酚类、鞣质、有机酸、香豆素、强心苷、黄酮、蒽醌、甾体 3、 ? 5%HCl-乙醇提取液——生物碱 4、 ? 石油醚提取液——甾体、萜类、脂肪油…… 预试验的注意事项 1．根据各种成分的不同性质，选用适宜的溶剂提取，以保证有效成分能被提取出来。 2．试验提取液的浓度应足以达到各该反应的灵敏度。 3．试验提取液的酸碱度（pH）值应不致影响鉴别反应中所需要的pH值。相差甚大时应事先调节。 4．提取液较深时，容易影响观察鉴别反应的效果，此时可适当稀释，或进一步提纯。  5．鉴别反应时应注意防止多类成分的相互干扰，以免出现假阳性，或颜色不正等情况。最好在化学鉴别的同时，做空白试验和对照试验（用已知含某类成分的中草药或纯品做阳性对照）。 6．在鉴别试验中，如果某一类成分的几个鉴别反应结果不一致时（即有的呈阳性反应，有的呈阴性）则应进行全面分析。首先应注意呈阳性反应的试验是否属于该类成分的专一反应，否则应检查其他类成分能否产生该反应，从多方面加以判断。但也应注意，某些反应只能对某一类成分中的某个化学基团呈性反应，如检查黄酮类的盐酸――镁粉试验，它只对黄酮类中的羟基黄酮类（黄酮醇类）反应明显，其余类的黄酮类则不甚明显，但也不能轻易否定不是黄酮类，为了避免孤立和片面的下结论，一定要全面考虑综合分析。 二、鉴别方法 1、 ? 氨基酸、多肽、蛋白质 （1）加热沉淀试验：加热煮沸 →混浊或沉淀 （蛋白质）????? ?+5%H2SO4（不加热）→混浊或沉淀 （2）双缩脲反应：+40%NaOH，1%CuSO4 →紫色、红色或紫红色（多肽、蛋白质） （3）茚三酮反应：+0.2%茚三酮试液 →蓝或蓝紫色（氨基酸、多肽、蛋白质） （4）吲哚醌反应：+吲哚醌试液 →各种颜色（氨基酸） （5）Millon反应：+Hg，H2NO2 →红色（蛋白质分子中有酪氨酸组成） （6）Hopkins-Cole反应：+乙醛酸，浓硫酸 →各色（蛋白质分子中有色氨酸组成） （7）氨基酸的薄层层析检查： 吸附剂——硅胶? 展开剂—— n-BuOH，n-BuOH：HAc：H2O ???????????????? 显色剂——0.25%茚三酮试液 →紫红色斑点 2、 ? 皂苷 （1）泡末试验：振摇 →大量持续性泡末 ?????????+0.1M HCl ??