教案【生物课件】植物DNA、RNA及蛋白的提取与分析.pptVIP

1、样品不纯 2、样品降解 3、样品得率低 4、样品电泳时检测不到条带 一、DNA样品不纯 1. DNA中含有蛋白、糖类、酚类杂质 2. DNA在溶解前，有酒精残留，酒精抑制后续酶解反应 3. DNA中残留有金属离子 1. 重新抽提DNA，去除蛋白、糖类、酚类等杂质 2. 重新沉淀DNA，让酒精充分挥发后再溶解 3. 增加70％乙醇洗涤的次数（2-3次） 原因 对 策 二、DNA降解 1. 材料不新鲜或反复冻 融 2. 未很好抑制内源核 酶的活性 3. 提取过程操作过于 烈，DNA被机械打断 4. 外源核酸酶污染 5. DNA反复冻融 1. 尽量取新鲜材料，低温保存材料避免 反复冻融 2. 液氮研磨组织后，应在解冻前加入裂 解缓冲液；提取内源核酸酶含量丰富 材料的DNA时，可增加裂解液中螯合 剂含量 3. 细胞裂解后的后续操作应尽量轻柔 4. 所有试剂用无菌水配制，耗材经高 灭菌 5. 将DNA分装保存于缓冲液中，避免 复冻融 对 策 原因 1. 实验材料不佳或量少 2. 破壁或裂解不充分 3. 沉淀不完全 4. 洗涤时DNA丢失 1. 尽量选用新鲜（幼嫩）的材料 2. 液氮研磨充分，适当延长裂解时间 3. -20℃下低温沉淀；延长沉淀时间；加辅助物（NaAC或NaCl)，促进沉