实验十五：胰酶对似蛋白质的消化和影响酶作用的因素.docVIP

重庆医科大学生物化学实验报告 年级 系 班 组 姓名 胰酶对蛋白质的消化和影响酶作用的因素 实验目的 ：1、学习和掌握影响酶作用的因素。2、熟悉酶的催化作用。 实验原理 ：蛋白质或者多种肽物质在蛋白水解酶的作用下，水解肽键，生成小分子肽或者氨基酸。蛋白水解酶对肽键具有一定的选择性，在消化道中，几种蛋白水解酶共同作用才能使蛋白质彻底水解为氨基酸。本实验随着白明胶的不断水解，以还原的银颗粒逐渐脱落下来，底片逐渐变透明，根据底片是否透明以及透明的程度来判断胰酶的活性的高低。酶是一种生物催化剂，酶的活性受到多种因素的影响，这些包括酶浓度，底物浓度、温度、pH、抑制剂和激活剂。 实验材料和器材：1、器材 曝光定影底片、试管与试管架、吸量管、恒温水浴箱、电热水浴锅、冰浴。2、试剂 胰酶溶液、0.1mol/L磷酸缓冲液（pH=5）、0.1mol/L磷酸缓冲液（pH=7）、0.1mol/L磷酸缓冲液（pH=10）、0.2mol/L HgCl2 溶液(剧毒)、0.2mol/L NaCl。 实验步骤 ：1、酶浓度对酶活性的影响 试剂 试剂编号 1 2 3 4 胰酶溶液（ml） 1.5 1.0 0.5 - 蒸馏水（ml） - 0.5 1.0 1.5 磷酸缓冲液（ph=7） 3.0 3.0 3.0 3.0 试剂 试管编号 1 2 3 4 胰酶溶液（ml） 1.0 1.0 1.0 1.0 磷酸缓冲液（ph=7） 3.0 3.0 3.0 3.0 加曝光片前 100℃水浴 40℃水浴 冰浴 冰浴 保温观察 40℃水浴 40℃水浴 40℃水浴 冰浴 试剂 试管编号 1 2 3 胰酶溶液（ml） 1 1 1 磷酸缓冲液（ph=5） 3 - - 磷酸缓冲液（ph=7） - 3 - 磷酸缓冲液（ph=10） - - 3 试剂 试管编号 1 3 胰酶溶液（ml） 1.0 1.0 1.0 磷酸缓冲液（ph=7） 3.0 3.0 3.0 Nacl溶液（滴） 3 - Hgcl2 溶液（滴） - 3 放入相同大小曝光底片1张，记录时间，40℃水浴。 【实验结果】 ： 1、酶浓度对酶活性的影响（表1） 2、温度对酶活性的影响（表2） 3、pH对酶活性的影响（表3） 4.、抑制剂对酶活性的影响（表4） 实验结论 ： 在酶触反应系统中，当底物浓度远远超过酶浓度时，酶触反应速度与酶浓度成正比关系。酶触反应速度随着酶浓度的增加而加快，随着酶浓度的降低而减慢。温度对酶活性有显著影响。低温时酶反应速度缓慢。当温度逐渐回升时候，酶触反应速度加快。低温时酶活性虽然很低，但酶很稳定，不容易发生变形，温度回升后，酶可以恢复活性。达到某一温度时酶触反应速度最大，酶活性最高，此温度成为酶的最适温度，胰酶的最适温度在40摄氏度左右。胰酶的最适pH在7左右。Hg离子能抑制胰酶的活性。酶浓度，底物浓度、温度、pH、抑制剂和激活剂等多种因素，都影响酶的活性。 注意事项 ：1、在研究一种因素对酶的活性的时，需要严格的控制反应中其他因素保持不变，只能改变要研究的某一种因素。2、掌握好水解程度是本实验的关键之一。3、HgCl2有毒，操作时要格外小心，严防中毒。 思考题： 除了本试验中观察的因素以外，影响酶活性的因素还有哪些？ 答：底物浓度等。 酶反应的最适温度是一个常数吗？它和哪些因素有关？高温和低温对酶活性的影响有何不同？ 答：酶的最适温度对于酶不是一个特征性常数，它与反应的条件（如作用时间的长短、底物浓度、酶浓度、pH等）有关。低温时酶活性降低，温度回升后，酶可以恢复活性，高温时酶活性降低，适当降低温度，酶可以恢复活性，温度过高时，酶变性，降低温度，不能恢复活性。 在抑制剂对酶活性的影响试验中设立的1、2、3号试管分别起什么作用？ 答：试管1是做空白对照；试管2做对照，排除氯离子对酶活性的影响；试管3是实验组。