骨髓来源巨噬细胞中有效地敲除floxed基因的新方案.PDFVIP

安徽农业大学学报, 2015, 42(6): 898-903 Journal of Anhui Agricultural University [DOI] 10.13610/ki.1672-352x008 网络出版时间：2015-8-25 9:54:52 [URL] /kcms/detail/34.1162.S0954.016.html 骨髓来源巨噬细胞中有效地敲除floxed 基因的新方案 1 1 2* 何 丽 ，熊思东 ，肖 晖 (1. 苏州大学生物医学研究院，苏州 215123 ；2. 中国科学院上海巴斯德研究所，上海 200031) 摘 要：探索了在骨髓来源巨噬细胞（BMDMs ）中有效地敲除floxed 基因，更好地研究基因敲除引起的表型 的新方案。由于传统方法往往导致floxed 基因不能被 LysM-cre 酶高效地敲除，阻碍了 BMDMs 在一些遗传学方面 的应用。通过调整培养基的更换时间，及时补充新鲜的 M-CSF ，使用胰酶消化分盘，有效地提高了细胞得率，并 增强了基因在 BMDM 中的敲除效率。与传统方法相比，新方案将BMDMs 得率增加了 1 倍，每只小鼠能获得接近 7 5 ×10 个 BMDMs 。新方案也显著性地提高了巨噬细胞中 mTOR 基因的敲除效率，从 36.77%±5.07% 提高到了 76.9%±7.83%。新方案获得的LysM-cre/mTORfl/fl BMDMs 与 mTORfl/fl BMDMs 相比，在应答 LPS 刺激方面出现了 显著的表型差异，表达了更多的细胞因子 IL-6 和 IL-12 。在小鼠来源受限和需要提升巨噬细胞中特定基因敲除效率 的情况下，本方案具有极为突出的优势，用少量的小鼠获得可靠的实验数据，也符合动物实验的“3R”原则。 关键词：髓源巨噬细胞；LysM-cre；floxed 基因；基因敲除 中图分类号：Q813 文献标识码：A 文章编号：1672−352X (2015)06−0898−06 An improved method for efficiently deletingfloxed genes in bone marrow-derived macrophages 1 1 2 HE Li , XIONG Sidong , XIAO Hui (1. Institute of Biology and Medical Sciences, Soochow University, Suzhou 215123; 2. Institute Pasteur, Shanghai Chinese Academy of Sciences, Shanghai 200031) Abstract: Given the conventional method used to generate bone marrow-derived macrophages (BMDMs) in vitro often resulted in inefficient deletion of floxed genes by LysM-cre, we attempted to improve this method to gain larger number of BMDMs with better deletion efficiency of floxed genes. By adjusting the schedule for me- dium change to maintain stable M-CSF concentration and u