微流路精子分离器优选技术对精子质量的影响.pdfVIP

and 蓊鬻笺鎏·Reproc!tjction Physiology 微流路精子分离器优选技术对精子 质量的影响 李雁冰1，李井春卜，贺显晶1，孙 蕊1，甘 艺1，舟桥弘晃2 (1．黑龙江八一农垦大学动物科技学院，黑龙江大庆163319； 2．日本冈山大学环境生命科学科，日本冈山市700—8530) 摘 要：为了体外受精分离出优质活力精子．筛选出有效的优质精子的分离方法。采集小鼠附睾中精液，稀释 后利用微流路精子分离器(MFSS)分离精子，检测及分析分离后的精液质量。结果表明：精液样本通过MFSS分 离前后，精子活力由43．12％提高到87．18％(PO．05)；直线速度由161．20I山m／s提高到248．24tzm／s(PO．05)。与 上游法相比．经微流路精子分离器优选精子后，精子质量得到较大的改善。 关键词：微流路精子分离器；优选技术；精子质量；小鼠 中图分类号：$865．3 文献标识码：A vitro 获得优质的精子是进行体外受精技术(In 自于哈尔滨医科大学实验动物中心，自由饮水，自由 采食，12～14bY6照，室温20，26℃。 fertility，IVF)的重要环节之一…。优质精子分离方法 对精子质量的影响也是不尽相同。如何分离出优质 1．2试剂与仪器实验所用药品没有特殊说明，均 的精子，避免精子损伤的问题成为辅助生殖技术中 的研究热点。 7．40)，经微孔膜滤器 (按照HTF配置表配制)(pH (0．22 目前，随着辅助繁殖技术的发展，国内外建立了 txm孑L径)过滤灭菌，4℃条件下保存待用。实验 一些体外优选精子的方法，但目前常采用的方法有 仪器主要有CO：培养箱、迈朗精子全自动质量分析仪 上游法、密度梯度离心法等【2-3I。上游法存在回收率等。 低、精子质量差的缺点，而密度梯度离心法经过离心 1．3方法 处理对精子造成损伤，操作时间长并且有活力精子 1．3．1精液的制备选择性成熟的雄性小鼠(8～16 回收率低等缺点(4]。近来，有报道称，利用微流路精 周龄)，采用颈椎脱臼法处死小鼠，剖腹，取出两侧 子分离器(Microfluidicsorter，MFSS)对精子分附睾放入预先准备好的平皿培养液中，每个附睾用 sperm 离且进行体外受精，取得了较好效果f5-61。MFSS主要手术剪刀剪4～6个小口，让精子自由流出，处理5～ 利用具有活力的精子可以穿越微流通道中两股液流 10min，将附睾组织块检出，精液收集到带盖试管 层流的原理，将有活力的精子与没有活力的精子或 中，放置在37℃，5％CO：培养箱中备用。 死亡的精子以及精液中的杂质细胞进行分离的|71。 本实验通过对常规精子分离方法(上游法)与微 烯塑料材质制成，分为4个小室a、b、c和d，a为贮精 流路精子分离器(MFSS法)分离精子时对精子质量室；b为培养液室；c为运动性良好的精子分离室；d 参数的影响比较，探讨MFSS法优选技术对精子质量为运动不良精子分离室见图l。 的影响。 I 1材料与方法 1．1 实验动物昆明系小白鼠(雄性8～16周龄)购 ，j!