2017_2018学年高中生物第六章蛋白质和DNA技术第二节DNA片段的扩增__PCR技术学案中图版选修.docVIP

第二节　DNA片段的扩增——PCR技术 1．理解PCR扩增DNA片段的原理。 2．尝试PCR技术的基本操作和应用。 一、细胞内的DNA复制 过程：首先在解旋酶的作用下解开DNA双链；接着在RNA聚合酶的作用下，以DNA单链为模板，合成一段RNA引物（两条DNA模板链各需一个RNA引物）；然后以RNA引物为起点，在DNA聚合酶的作用下，以四种脱氧核苷酸为原料，按照碱基互补配对原则合成两条新的DNA子链。 二、DNA体外扩增——PCR技术 1．概念：DNA体外扩增技术实际上是在体外模拟细胞内的DNA复制过程，形成大量特异性的DNA片段，这个反应过程称为聚合酶链式反应，简称PCR。 2．PCR过程与细胞内的DNA复制过程的区别 （1）PCR过程需要的引物不是RNA，而是人工合成的DNA单链，其长度通常为20～30个脱氧核苷酸。 （2）PCR过程中DNA的解旋不依靠解旋酶，而是通过对反应温度的控制来实现的。 3．PCR技术的操作 进行PCR过程前，将PCR缓冲液、DNA模板、一对引物、四种脱氧核苷酸、DNA聚合酶、Mg2＋等成分加入到一种特制的微量离心管中。 ①高温变性：把离心管置于95 ℃的高温中，DNA碱 基对之间的氢键断裂，DNA双链拆开成两条单链。 ②低温复性：将离心管置于55 ℃的环境中，使一对引物分别结合到两条分开的模板链上。 ③中温延伸：再将离心管转置于72 ℃的环境中，在D