19.培养基配制的关键控制点.pptVIP

培养基配制的关键控制点 尚丽男，朱文革，周振成，张雪梅 北京信得威特科技有限公司 摘要 培养基的质量是兽医微生物实验室检测工作的基础，培养基的制备和使用是微生物实验室检测工作的重要环节，培养基制备过程中要对培养基的购买、培养基的制备、培养基的运输、贮存加以保证和注意，本文还对公司统一配制培养基和各个部门单独配制培养基进行了比较试验。结果证明只要严格按培养基制备方法制造，效果是一致的，但由公司统一配制对实验结果的准确性、减少人力物力有很大帮助。 关键词 培养基配制 贮存 统一配制 近几年来，国内外相继使用了微生物自动化鉴定系统，PCR检测技术和快速显色培养等技术，明显缩短了微生物鉴定时间，增加了鉴定准确度，提高了效率和能力，但是微生物分离、鉴定、保存以及微生物研究、开发和应用技术仍离不开培养基。培养基的制备和使用是微生物实验室检测工作的重要环节，培养基自身质量的优劣、保存是否得当、配制使用是否正确等都直接影响检测结果的准确性。 1.培养基配制 1.1培养基的购买 近20年来，我国培养基及其原材料的研究、开发、生产和应用进展迅猛。但国内商品培养基种类繁多，质量参差不齐，在配制过程中，常常会碰到一些问题而导致细菌培养失败，所以在配制培养基时，就应当严格控制培养基的质量。 商品微生物培养基的质量控制指标： 1.1.1包装与标签内容? 1.1.1.1包装：包装应严格密封，且不易破损。 1.1.1.2标签内容：标签应包括培养基名称、成份、规格、用途、用法、贮存、保质期（或有效期）、生产批号和生产单位等内容，标识应清楚。 1.1.2 理化指标? 1.1.2.1（1）感官性状： 商品培养基的干粉大多应为浅黄色粉末，粒度≥180目。培养基融化或灭菌后应色浅、澄明清晰、无沉淀（除配方中使用不溶物质的培养基外）。（2）干燥失重：又称水分或含水量。干粉商品培养基的干燥失重应≤7%。（3）pH值：应与该培养基配方中规定的pH值相符,误差不得超过±0.2。（4）凝胶强度：应统一使用凝胶强度g/cm2作为标准来表示培养基的硬度。商品干燥培养基的凝胶强度控制在450～650g/cm2之间，半固体培养基的适宜凝胶强度在90g/cm2左右。 1.1.2.2 无菌试验? 　　按批号随机抽出5%的实验培养基，按使用说明配制成新鲜成品培养基，与标本培养一致的环境条件培养试验，应无细菌生长。 1.1.2.3 稳定性试验 　　这是衡量商品培养基在保质期（或有效期、或失效期）内质量保证的试验指标，培养基的各项指标都应在保质期内得到保证。我国商品干燥培养基的保质期一般为2～3年。 1.1.2.4 细菌学质控试验? 细菌学质控试验是培养基质量性能试验（一般包括灵敏度和准确度），是培养基内在质量指标，它是用已知的标准菌株按照规程和标准的要求测定培养基性能是否符合。商品培养基和实验室自行制备的培养基均应进行细菌学质控试验，对所有使用培养基性能的预期结果，在使用前要得以证实。 1.2培养基的储存 干粉培养基应保存在阴凉干燥处，要避免阳光直射；开瓶后的干粉培养基极易吸潮，应注意防潮并在6个月内用完。应定期对储存中的培养基进行常规检查，如容器密闭性复查、首次开封日期、内容物的感官检查，如果培养基发生结块、颜色异常和其他变质迹象就不能再使用。 1.3 培养基的配制 1.3.1 培养基用水 水是微生物体内体外的溶媒。有了水，微生物才能吸收营养物质排泄废物。配制培养基要使用纯化水或注射用水，培养基制备用水应使用电导率小于1μs/cm的蒸馏水或与其同质的水，最好不使用离子交换器生产的去离子水。 1.3.2 称量 称量时要用专用的药匙，避免交叉污染而影响检验结果；干粉培养基易吸潮，如有条件，尽量在湿度较低的房间称取培养基。 1.3.3 复水 复水时不得用铜锅或铁锅，以防有离子混入培养基中，影响微生物的生长；容器的大小需大于复水后培养基总体积的2倍以上，避免在加热溶解过程中，培养基溢出；含有琼脂粉的培养基，在加热溶解之前可以浸泡数分钟；加热培养基时一定要进行搅拌，特别是琼脂培养基。为避免烧焦或沸腾溢出，对于少量的培养基最好使用沸水浴进行加热。烧糊的培养基营养物质被破坏，并可产生有毒物质，如发现焦化，或未溶解均匀前培养基有溢出，该培养基即不能使用，应重新制备。根据经验，用微波炉对盛有培养基的玻璃器皿进行加热，控制好时间，可以有效的避免烧糊。对于琼脂类培养基在融化时应使用沸水浴或流动蒸汽进行加热，最多只能加热两次，第二次在融化后仍未用完的培养基应弃去 。 1.4培养基的溶解