引物设计的原理和程序.PDFVIP

引物设计的原理和程序 一、设计原理 1、择合适的靶序列：设计引物之前，必须分析待测靶序列的性质，选择高度保守、碱 基分布均匀的区域进行引物设计。 2 、长度：一般来说，寡核苷酸引物长度为 15～30bp。 3、Tm 值：引物的 Tm 值一般控制在 55～60℃，尽可能保证上下游引物的 Tm 值一致， 一般不超过 2℃。若引物中的 G+C 含量相对偏低，则可以使引物长度稍长，而保证 一定的退火温度。 4 、 （G+C）含量：有效引物中（G+C）的比例一般为40～60％。 5、 碱基的随机分布：引物中四种碱基的分布最好是随机的，不存在聚嘌呤和聚嘧啶， 尤其在引物的 3’端不应超过 3 个连续的 G 或 C。 6、 引物自身：引物自身不存在连续 4 个碱基以上的互补序列，如回文结构，发夹结构 等，否则会影响到引物与模板之间的复性结合，尤其避免 3’末端的互补。 二、引物设计操作流程 二、 序列下载