中空纤维膜过滤技术在单抗生产中的应用-生物通.pdfVIP

中空纤维膜过滤技术在单抗生产中的应用 苗景赟 孙文改 解红艳 (通用电气医疗集团 GE HC Life Sciences) 作为生物药物的“重磅炸弹” ，大规模动物细胞培养生产治疗用单抗已成为生物制药发展的 主导。Mabselect SuRe 亲和层析结合 Capto Adhere 复合离子交换两步层析工艺已经成为 抗体生产工艺的亮点，而中空纤维膜过滤技术是一种快速高效的膜分离技术，具有容尘 量高、温和低剪切力、操作灵活、成本低、易于放大等优点，因此广泛应用于重组蛋 白、疫苗等生物制药领域。通过将中空纤维膜过滤技术和下游两步层析工艺相结合，可 以成功的迎接几十甚至上百公斤单抗生产所面临的挑战。 1.单抗的发展和面临的挑战 近年来，高密度细胞培养技术和大规模蛋白质生产纯化技术的不断进步，推动了治疗用抗 体产业化的发展。和传统的基因工程蛋白药物相比，治疗用单抗具有一些不同的特点： (1) 高剂量 单抗的给药剂量较高，一般从数百毫克到克级，且给药方式多为静脉注射。因此，抗体的 生产规模和产品质量都面临着巨大挑战。 为了满足日益增长的高剂量抗体药物需求，大规模细胞培养技术不断发展：细胞密度已达 7 8 1 10 ~ 10 cell/ml ；表达量从1~5g/L增加到10g/L ，甚至出现27g/L的表达量新高 ；细胞培 养规模从上千升增加到 20,000 升。这就要求开发一条高速、高载量的下游分离纯化工 艺，以便能够快速处理上万升的培养液，并实现每批几十公斤甚至上百公斤抗体的生产。 另外，高的给药剂量也对产品质量提出了更高的要求。为了保证药品安全，很多杂质成分 必需降低到极低水平，如宿主 DNA ，内毒素等；潜在的病毒、泄漏的亲和配基以及抗体 的聚集体也必须有效去除，这就要求采用更高效的分离纯化工艺，并对每步工艺去除各种 杂质的能力进行深入研究。 (2) 易形成多种变体 抗体是一类结构比较复杂的大分子，比活和稳定性很大程度上取决于其翻译后修饰的程 度，如糖基化、磷酸化等。在生产过程中会由于糖基化程度不同、蛋白酶作用、以及脱氨 基和脱酰胺等化学反应而产生性质不同的多种抗体变体2 ；另外，氧化、聚集和片段化也 是常见的降解途径。针对这些变体，在表达和纯化过程中选择参数 (如pH、盐浓度等) 时 3 要充分考虑到抗体的稳定性；另外，应严格控制细胞培养的条件，如溶氧、渗透压等 ； 同时加快下游分离纯化的速度，最大程度避免抗体在纯化过程中产生变体，保证终产品的 均一性和高比活，也有利于控制终产品的内毒素水平。 (3) 高附加值 作为多种癌症和抗排异的特效药，高纯度的治疗用抗体具有极高的市场价值。因此收率成 为抗体生产过程中的重要考量指标。减少不必要的工艺步骤不仅可以提高收率，还能提高 生产效率。 1 基于抗体药物的上述特点，为了提高生产效率，达到严格的产品质量要求，抗体的生产工 艺也必须着眼于：高处理速度、高载量，更简单有效！ 通用电气医疗集团为单抗生产提供了快速高效的完整解决方案（图 1），将中空纤维膜过 滤技术和高流速高载量的新一代Mabselect SuRe亲和层析介质、Capto Adhere两步层析工 艺相结合，成为治疗用抗体生产纯化的趋势4 。 高密度细胞培养液 中空纤维膜微滤一步澄清 MabSelect SuRe 捕获 病毒灭活与去除 Capto Adhere 精细纯化 50K 膜包浓缩/洗滤（换缓冲液） 0.22u NFF 除菌过滤 注射用抗体 图1治疗用单抗的一