单增李斯特菌internalina的表达纯化及多克隆抗体的制备.pdfVIP

微生物学通报 APR 20, 2012, 39(4): 495−502 Microbiology China © 2012 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ 研究报告 单增李斯特菌 InternalinA 的表达、纯化 及多克隆抗体的制备 * 李志清 向军俭 李雨辰 闻一鸣 杨红宇 (广东省分子免疫与抗体工程重点实验室 暨南大学抗体工程研究中心 广东 广州 510632) 摘 要: 【目的】克隆表达单增李斯特菌膜表面蛋白InternalinA (InlA), 经免疫家兔获得 多克隆抗体, 为建立其免疫磁珠富集快速检测方法奠定基础。【方法】利用生物软件设计 单增李斯特菌 inlA 基因的引物, 通过 PCR 扩增出 inlA 基因, 并将其克隆至pET28a(+)原 核表达载体, 转化大肠杆菌BL21 进行优化表达。镍柱纯化表达产物, 质谱鉴定重组蛋白, ELISA 分析其免疫原性。免疫家兔, 制备其多克隆抗体。间接ELISA 检测多抗的效价及 交叉性, 免疫荧光分析多抗与单增李斯特菌菌体结合的特异性。【结果】成功表达了InlA 蛋白, 融合表达产物分子量约为92 kD, 质谱鉴定其为InlA 蛋白; 免疫家兔获得的抗血清 效价为 1:100 000, 除与金黄色葡萄球菌约20% 的交叉外, 与副溶血弧菌等其它病源菌均 无交叉; 免疫荧光证实该多抗特异性结合于单增李斯特菌膜表面, 与同种属的威尔斯李 斯特菌不结合。【结论】成功制备了单增李斯特菌特异性的兔多克隆抗体, 为单增李斯特 菌免疫磁珠富集快速检测方法的建立奠定了基础。 关键词: 单增李斯特菌, InlA, 多克隆抗体 Expression and purification of InternalinA from Listeria monocytogenes and preparation rabbit polyclonal antibody against InternalinA * LI Zhi-Qing XIANG Jun-Jian LI Yu-Chen WEN Yi-Ming YANG Hong-Yu (Guangdong Province Key Laboratory of Molecular Immunology and Antibody Engineering, Antibody Engi- 基金项目：广东省科技计划项目(No. 2009B030803010) *通讯作者：Tel: 86-20 : txjj@ 收稿日期：2011-12-01; 接受日期：2012-02-02 496 微生物学通报 2012, Vol.39, No.4 neering center of Jinan University, Guangzhou, Guangdong 510632, China) Abstract: [Objective] To clone and express protein InternalinA (InlA) from Listeria monocy- togenes (Lm) and