临床免疫测定室内质量控制.ppt

酶联免疫吸附试验（ELISA）室内质量控制 免疫室 2011.8.22  室内质量控制（Internal Quality Control,IQC)的概念 ?由实验室工作人员，采取一定的方法和步骤，连续评价本实验室工作的可靠性程度，旨在监测和控制本实验室工作的精密度，提高本室常规工作中批内、批间样本检验的一致性，以确定测定结果是否可靠、可否发出报告的一项工作。 ?可概括为:(1)执行者：实验室技术人员；(2)目的：监测实验室测定的重复性；(3)功能：决定了当批测定的有效性，报告可否发出。是对实验室测定的即时性评价。 室内质量控制（IQC）的基本内容 （1）测定前的质量控制； （2）统计学质量控制； （3）质量控制的评价。 酶联免疫吸附试验（ELISA） 操作简单，灵敏度高，特异性好，经济安全等特点而在临床上广泛应用，但是由于其操作步骤复杂，一般包括试剂准备，样本收集，加样，温育，洗涤，显色，比色，结果判定等，其中任何一项操作不当都会对检测结果产生很大影响。因此，必须加强ELISA检测的全面质量控制，保证其结果的准确可靠。 试剂优质的试剂是保证检验质量的基础。近年来，国家采用批检的形式对ELISA试剂严格把关，但不同厂家的试剂在使用效果上仍存在差异，试剂质量在很大程度上决定了检测水平.我们从去年将原来使用的北京科卫试剂，更换成现在的英科新创，同时采用上海科华对可疑样本进行复检，目前来看效果很好。 从4℃冰箱取出的试剂必须放置室温20～30 min 后再启用，否则水化层的形成可能影响试剂的原始浓度及试剂中溶质分子的均匀分布。根据蛋白质在冷冻过程中出现蛋白分子分布改变的特点，试剂正式启用前应充分混匀。不同批次的试剂在制作过程中很难保证质量完全一致，因此必须选择和订购长批号的试剂，并保证保存条件，严格执行这一标准可以避免试剂批号改变而重建质控体系及重新评估试剂的复杂过程，并且能够保证结果的稳定性。 标本 在低温下保存时间过长，IgG可聚合成多聚体，在间接法ELISA测定中会导致本底加深，甚至出现假阳性结果。通常血清标本可在2～8℃保存1 周，冷冻保存时间会更长。血清标本应充分离心，否则可因纤维蛋白原非特异吸附于微孔而造成假阳性结果。冷冻保存标本避免反复冻融，标本的反复冻融会因其所产生的机械剪切力对标本中的蛋白等分子产生破坏作用，使抗体效价下降从而引起假阴性结果。 操作因素 加样　 加样器是一种比较精密的工具，其在长时间使用时会因机械磨损或推动杆内附着的血痂等原因造成加样不准，因此必须定期对加液器进行维护和校准。每次加不同的标本均需更换吸嘴，以免发生交叉污染；加样速度不可太快，以免将标本加在孔壁上部，并注意不要溅出或产生气泡。因此建议在加酶结合物和底物时用多道加液器，或者双人同时加样以减少操作时差对结果的影响，另外有些项目在检测前需要稀释以减少非特异性反应。 温育 温育的温度：育常采用的温度有43 、37℃、室温或4℃等。37℃是实验室中常用的温育温度，也是大多数抗原抗体结合的最适反应温度。抗原抗体反应一般在37℃经1～2 h 产物的生成可达顶峰，为加速反应，可在一定范围内提高反应的温度并在反应过程中连续振荡来增加抗原抗体接触的概率。抗原抗体反应在4℃更为彻底，形成的产物更多、更稳定，但因所需时间太长，在ELISA检测中一般不予采用。 干扰因素 标本患者标本中有可能含有干扰试验的免疫物质，导致假阳性或假阴性的结果，干扰因素一般可分为两类，即内源性和外源性干扰因素。内源性干扰因素一般包括类风湿因子、补体、高浓度的非特异性免疫球蛋白、异嗜性抗体及某些自身抗体等，避免内源性干扰因素主要通过选择合适的试剂；外源性干扰因素包括标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存时间过长及标本凝