酶透析分离技术.pptVIP

酶的透析分离技术 一、实验原理 透析是一种膜分离技术，是利用小分子物质的扩散作用和半透膜两侧溶质浓度差为传质推动力，从溶液中恨你出小分子物质二截留大分子物质的过程。 透析时，样品液装在透析袋内，袋外史谁活着缓冲液，在一定的温度下，透析一段时间后，样品液中的小分子物质不断地从透析袋内透出到袋外。 二、透析原理示意图 三、透析分离出的物质 透析在酶的分离纯化过程中极为常用。通过透析可以除去酶液中的盐类、有机溶剂、低分子量的抑制剂等小分子物质。当透析膜（袋）的截留极限一般在分子量5000左右。 四、透析的操作 1、透析袋的处理 2、透析袋的检查 3、装样 4、透析 五、酶液透析的操作工艺流程 六、操作要点详解 1、透析袋的处理：新购的透析袋因含有增塑剂（也是防干裂剂）甘油、硫化物一级重金属离子，使用前必须除去。方法是分别用蒸馏水、0.01mol/L醋酸或稀EDTA溶液浸泡，洗后再用。 2、透析袋的检查：取一段长13~15cm长的透析袋将透析袋一端扎紧，装入蒸馏水，轻轻挤压，检查膜有无水渗出，若有则说明有小孔，不能使用；若无漏孔，倒掉水即可供装样使用。 3、装样： 将样液10·15ml灌入至透析袋长度的1/2~2/3，不能灌满。处理液含盐分越多吸入的水分越多，袋涨得越大，易涨破，流出空袋应越长。然后排出袋中的空气，再扎紧袋口。 4、透析： 取一个大烧杯，加入20倍以上样品体积的0.01mol/L的pH6.8的磷酸盐缓冲溶液，将装好样品的透析袋悬于大烧杯中部，底部放一个搅拌子（磁棒），用磁力搅拌器缓慢搅拌以促进溶液交换。透析过程中需要换洗脱溶数次，使小分子由高浓度向低浓度的扩散作用继续进行，直至达到透析平衡为止。 附：透析袋透析的简单装置示意图 * * 小分子 大分子 水（缓冲液） 透析膜 被截留 样液 装样 透析袋处理 扎袋 透析 透析检查 2~5℃低温下；使用缓冲液