CFTR氯离子通道激活剂的筛选及其分子药理学机制研究.pdfVIP

中文摘要：囊性纤维化跨膜电导调节因子（cystic fibrosis transmembrane conductance regulator, CFTR ）是一种 AMP/PKA 依赖的上皮氯离子通道，同时又是某些膜转运蛋白 C 的调节因子。属于ATP 结合盒（ATP binding cassette, ABC ）转运蛋白超家族的成员。 CFTR 在哺乳动物中所有与分泌和吸收有关的上皮组织（例如小肠、气道、胰腺、汗腺、 输精管细胞、心肌细胞、血管平滑肌细胞）中广泛表达。CFTR 的主要功能是介导跨上 - + + 皮细胞 Cl 转运、控制氨敏感的上皮细胞 Na 通道（epithelial Na channel, ENaC ）、促进 - + HCO3 分泌及调节 K 通道等，因此 CFTR 与多种生理和病理状态密切相关。CFTR 功能 障碍会引起致死性遗传疾病囊性纤维化病（cystic fibrosis, CF ）、特发性慢性胰腺炎 （idiopathic chronic pancreatiti, ICP ）、干眼病（keratoconjunctivitis sicca, KCS ）、习惯性 便秘（habitual constipation ）等；而霍乱毒素和耐热性致病性大肠杆菌内毒素导致的分 泌型腹泻（secretary diarrhea ）、多囊肾病（polycystic kidney ）等则是CFTR 活动过强引 起的。因此寻找能够调节野生型和突变型 CFTR 功能的小分子调节剂的工作近年来受到 了广泛重视并取得了较大进展，目前仍是CFTR 有关研究的重要目标之一。 我们利用含∆F508-CFTR （或wt-CFTR ）的表达质粒与一种对卤族元素碘离子高度 敏感的荧光绿蛋白突变体EYFP-H148Q 的表达质粒共转染Fischer 大鼠甲状腺上皮细胞， 得到稳定表达该蛋白的两种细胞系（FRT/∆F508-CFTR /EYFP-H148Q 和 FRT/wt-CFTR /EYFP-H148Q-I152L ）。以此为筛选模型对49 种生物碱类化合物和 20 种挥发油类化合物 进行筛选，目的是为了筛选出wt-CFTR 氯离子通道激活剂和∆F508-CFTR 氯离子通道激 活剂及蛋白质质膜转运障碍纠正剂，并对其分子药理学特征进行系统研究。我们得到了 8 种生物碱类化合物和 6 种挥发油类化合物对 wt-CFTR 均具有明显的激活作用。由于前 期本实验室已对生物碱中有明显活性的菏叶碱和白鲜碱有系统的研究，因此我们对其余 六种生物碱类化合物进行进一步的研究分析，同时我们也分析了挥发油类化合物中活性 最强的对羟基苯甲酸丁酯。结果表明，六种生物碱类化合物和对羟基苯甲酸丁酯对野生 型 CFTR Cl-通道具有明显的激活作用，其中盐酸罂粟碱、尼莫地平、对羟基苯甲酸丁酯 对∆F508 突变型通道开放障碍也有明显的激活作用，同时胡椒碱也表现出了一定的活 - 性。此外，六种生物碱类化合物和对羟基苯甲酸丁酯对 G551D 突变型 CFTR Cl 通道都 无激活作用，也不能纠正∆F508-CFTR 蛋白胞内转运的障碍。上述七种单体化合物对野 - 生型和突变型 CFTR Cl 通道的激活作用具有作用迅速、可逆、剂量依赖的特点，初步机 制分析结果表明它们可能是通过与 CFTR 直接结合而发挥作用的。 - 本研究中七种单体化合物对 CFTR Cl 通道具有激活作用不仅为阐明 CFTR 的结构 与功能之间的关系，以及作为先导化合物开发探索治疗与 CFTR 突变有关疾病等方面具 有重要用途，而且为进一步明确这七种化合物其它方面的药理机制奠定了基础。 关键词：CFTRCl-通道；突变；六种生物碱类单体化合物；对羟基苯甲酸丁酯；激活剂 Abstract :The CAMP-activated cystic fibrosis transmembrane conduc