葡萄的组织培养快繁技术.pdf

葡萄的组织培养快繁技术 赵晶，张洁，周英，章芳玫，张丽娟，张秀琼 甘肃农业大学生命科学技术学院（730070 ） E-mail ：zhaojing610@126.com 摘 要：植物组织培养，是根据植物具有全能性的理论，利用植物体离体的器官、组织或细 胞，如根、茎、叶 、花、果实、种子、胚、胚珠、子房、花药、花粉以及贮藏器官的薄壁 组织、维管束组织等，在无菌合适的人工培养基及光照、温度等条件下，能诱导出愈伤组织、 不定芽、不定根，最后形成完整的植株。目前，我国果树无病毒苗木迅速向产业化方向发展， 葡萄组培也成为实际应用最多、最有成效和最成熟的一项生物技术。 关键字：愈伤组织，原生质体，脱毒苗，培养基 1. 葡萄脱毒组培快繁技术的研究与应用 1.1 葡萄试管快繁研究简史 1944 年，morel 就开始了葡萄愈伤组织的培养。1955 年 Fallot 、1959 年 Pelet 等培养葡 萄的茎生成不定根。1961 年 Galzy 成功的培养了葡萄茎尖，并开始了葡萄低温离体保存， 首创节培法。Mullines 和 Srinivasan （1976）第一个报道了葡萄体细胞胚胎发生。1978 年曹 孜义等从欧亚品种葡萄花药培养诱导出大量二倍体植株，同年 Krul 等也从杂种葡萄花药愈 伤组织上诱导出大量不定胚。1978 年 Barlass 和 Skene 报道了葡萄试管繁殖技术。1979 年曹 孜义等再国内首先报道了葡萄试管繁殖技术，并于次年建立了我国第一个植物组织培养的葡 萄园。齐与枢、曹孜义等历经 8 年，完成了葡萄试管繁殖生产技术试验，并取得明显的经济 效益和社会效益。1989 年 Mullines 在第五界国际葡萄育种学术讨论会，做了“组织培养在 葡萄遗传改良育种中的应用”的大会报告，总结了这方面的研究进展。“七五”、“八五” 期间，国家把“葡萄脱毒及无苗试管繁殖技术”列入攻关计划，组织全国有关专家协作攻关， 使葡萄离体快繁技术得到了很快的发展和应用。 1.2 葡萄试管快繁的意义 [1] “葡萄试管繁殖是葡萄组织培养实际应用最多、最有成效和最成熟的一项生物技术 。” 1.2.1 用语希缺良种的快速繁殖 对新育成或选育的单株或新引进的良种，利用试管繁殖，可在短期内大量提供这些急需 的良种苗木，以满足生产上的需要。 “如Harris等（1982）用巴可品种 3——4mm长的茎，4 个月生产出 1.2完株苗Barlass等（1978 ）培养葡萄茎尖4 个月成苗 8000 株[21] 。”“Monette( 1989) 用常规硬枝扦插 1 年仅得到 12 株苗，而试管苗繁殖每月得到了 2000 株苗。曹孜义、齐与枢 等采用葡萄茎段培养，每月能增殖 2.4——8.2 倍，推算一个苗一年理论上可繁殖 8.76 万— —222.3 万株苗，实际上已做到一株先锋试管苗一年繁殖了 3.1 万株成苗。另外，一些珍惜 杂交品种、纯合植株或转基因植株、多倍体植株也可用此法快速扩大繁殖。 1.2.2 用于脱除病毒 葡萄病毒类型繁多，危害较大，致使葡萄产量降低，品质变劣，病毒又很难防治，成为 生产上一大威胁。利用热处理和茎尖培养相结合方法能有效的脱除病毒，该项技术已在国内 外广泛应用。 -1- 1.2.3 试管苗便于葡萄种质交换和保存 葡萄试管苗无病虫，若在经过脱毒和鉴定为无病毒苗，则更便于地区间、国际间品种和 种质资源的传递与交换，节省检疫和防治的人力、才力和时间。用试管苗保存葡萄种质，节 省大量土地、劳力和时间，也免受病虫、病毒的侵染。 1.2.4 有利于病理学、生理学及其他理论研究 利用葡萄组织培养，常年均可提供生长旺盛的苗木或组织、细胞，供病理学、生理学研 究，它是筛选杀菌剂和抗病品种 及筛选植物激素的方法。组织培养空间小，条件易控制 ， 不受季节限制，在加快遗传