蔗糖酶测定-2.pptVIP

20031021 蔗糖酶的分离提取及活力测定 课件编写制作、讲授及实验指导：郭慧云 一、目的要求 1.学习掌握3，5-二硝基水杨酸比色定糖 的原理和方法； 2.学习酶蛋白分离提取的原理； 3.学习掌握细胞破壁及抽提技术； 4.学习掌握酶活力测定及其计算的方法。 2、蔗糖酶活力测定的原理  3、蔗糖酶分离提取的原理 1）细胞破壁：就酶在生物体内的分布，可分为胞内酶和胞外酶，蔗糖酶系胞内酶。提取胞内酶时，要破碎组织和细胞，然后用一定的溶液提取，得到的材料称为无细胞抽提液。材料不同，破壁的方法也不同。 我们用的菌体（微生物）细胞破壁方法是：自溶法，即将菌体放在适当的pH值和温度下，利用组织细胞自身的酶系将细胞壁破坏，使细胞内的物质释放出来。 自溶时需加少量防腐剂，以防外界细菌污染。 自溶法的缺点是时间较长。 2）抽提： 抽提（或叫萃取）是将已破碎细胞壁的材料置于一定的条件及溶剂中，使被提取物释放出来的过程。 抽提液可用水或有机溶剂。大部分酶蛋白能溶于水、稀盐、稀碱或稀酸中。对于普通的酶多采用缓冲液，有利于酶的稳定。而一些与脂质结合较牢固的酶，常用有有机溶剂提取。 抽提时缓冲液的离子强度和pH值以及温度的选择，应既有利于酶的提取又保证酶的稳定。 三、试剂和器材