凯基端粒酶活性实时定量pcr法检测试剂盒人-凯基生物.pdfVIP

凯基端粒酶活性实时定量PCR法检测试剂盒 （人） 修订日期：2015.09.28 Cat Number：KGA1028H-KGA1029H Store at -20℃ for 12 months，避光 For Research Use Only （科研专用） 一、试剂盒说明 产品概述： 端粒是真核生物染色体末端特殊的DNA-蛋白结构，含多个重复序列 （5’-TTAGGG-3’），端粒结构的形成和功能的维 持需要端粒结合蛋白的直接或间接参与。端粒酶是细胞体内一种核糖核蛋白复合体，是由RNA 和蛋白质亚基组成的一种 特殊的逆转录酶，其可以利用自身的RNA 模板合成末端DNA，并添加到染色体末端以克服末端序列的丢失，从而使细胞 获得增殖能力。 端粒酶蛋白催化亚基 （TERT 或TRT）具有反转录酶的主要特征，其表达在正常细胞中受到抑制，研究表明，TERT 或TRT 的表达与端粒酶活性的表达一致，与端粒酶的活化程度密切相关。Wisman 等在人卵巢癌中利用逆转录PCR检测 hTERT 的mRNA 的表达，并采用TRAP法检测端粒酶活性，结果证实二者均存在于恶性肿瘤中并且表达模式相同。基 于上述原理，凯基实时荧光定量PCR端粒酶检测试剂盒通过检测TERT 的mRNA 表达水平来间接反应端粒酶的活性。 实时荧光定量PCR （SYBR Green Real-time PCR）方法以其卓越的快速性及定量性被广泛应用于科研领域，使用 本试剂盒可以准确简便地进行mRNA 的表达分析。试剂盒采用SYBR Green qPCR Master Mix 为荧光实时定量PCR和 Two-Step 荧光实时定量PCR 设计的最优反应体系，并结合特异性的细胞端粒酶催化亚基基因TERT 引物，简化实验步 骤和提高实验效率。Master Mix 含有Maxima Hot Start Taq DNA 聚合酶、dNTPS、进行优化处理的PCR反应缓冲液以 及SYBRGreen 染料。使用Hot Start Taq DNA 聚合酶，为PCR反应提供了更高的产量和灵敏度、特异性，能够检测低 至10个拷贝的目的基因。 本试剂盒可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线，对细胞基因进行准确定量、检测，重复性好，可信度高。 只需加入样品DNA 模板，反应即可进行。 备注：由于对端粒酶进行检测的所有方法都不能完全定量的检测细胞端粒酶的活性，同时TERT 基因或者蛋白的表 达与端粒酶之间的间接关系准确性有待于进一步研究，望客户根据实际选择使用。 产品应用： 适应于大多数的Real-time PCR扩增仪，包括Applied Biosystems，Eppendorf，Corbett，Bio-Rad，Roche，杭州 博日 （Line-GeneBioer）等品牌的PCR扩增仪。 二、试剂盒组份 KGA1028 KGA1029 组份名称 保存条件 20 tests 50 tests Maxima SYBRGreenqPCRMaster Mix （2×） 250μL 700μL Water,nuclease-free 300μL 800μL HumanTERT primer （10μM） 50μL×2 130μL×2 -20℃，避光 GAPDH-F Primer （10μM） 30μL 70μL GAPDH-R Primer （10μM） 30μL 70μL 三、操作步骤 样本的处理： 1. 提取样本RNA，并进行逆转录获得cDNA （参考凯基RNA 提取以及逆转录试剂盒） 2. 将试剂盒中的组分溶解后，轻轻混匀并低速离心。 3. 进行25μL体系的实时定量PCR请参考以下表格 （DNA 模板下一步中添加）：