小鼠单个植入前胚胎cdna文库的构建及应用.pdfVIP

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2018-08-19 发布于天津
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小鼠单个植入前胚胎cdna文库的构建及应用.pdf

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23 6 CHINA BIOTECHNOLOGY 2003 6 cDNA * * * 杨立新郁卫东李文雍张冲刘桂生陈清轩 ( 100080) 哺乳动物合子基因组激活和植入前胚胎阶段特异性表达基因的研究一直是发生物学研究的重点发现和克隆植入前胚胎阶段特异性表达的基因需要有效的方法, 阶段特异性cDNA 文库的构建和筛选是一种较好的方法用小鼠单个成熟卵细胞受精卵2细胞4细胞和8细胞 5 5 6 6 胚胎分别构建了cDNA 文库滴度分别为: 62 10 83 10 104 10 151 10 和 162 6 10 随机挑选了29 个克隆并进行了序列分析, 结果表明, 和已知表达序列标签( ESTs) 同源的序列为6552% ( 1929) , 未知序列为 1379%( 429) , 并发现了2 个重复序列用特异性引物, 分别对小鼠持家基因( actin) 和发特异基因( OCT4) 进行PCR 扩增, 结果表明, 所建立的cDNA 文库可以反映小鼠胚胎在不同发阶段整个基因群体的转录活性, 为阶段特异性基因的筛选和小鼠早期阶段基因表达模式的研究提供了一种有价值的资源库阶段特异性表达基因小鼠植入前胚胎 cDNA 文库 ; ( PMSG) [1] ; hCG ; NP40 dNTPs Sigma [2] ; RNase ;Taq DNA pGEMT , XGalIPTG Promega ; SMART , IV Oligonucleotide; CDS III3 PCR primer; 5 PCR [ 3] Primer; PowerScript Reverse Transcriptase; 5 First Strand Buffer; DTT ; Proteinase K; Sf i I Enzyme; 10 cDNA Sf i I Buffer; 100 BSA; TriplE 2; T4 DNA Ligase; , 10 DNA Ligation Buffer; E . coli XL1Blue; 50 , Advantage 2 Polymerase Mi ; 10Advantage 2 PCR PCR , cDNA Buffer; 50 dNTP Mi CLONTECH , 29 , 350~ 12 248 [3~ 5] 1500bp, cDNA , Capco[ 6] 6~ 8 KM PMSG hCG, , 248 1 05%, 11 Tyrode s( pH 20~ 25) 6~ 8 KM ( ) , PBS RT 1