抗肠炎沙门氏菌单链抗体制备及其特异性分析-生物通.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１３，３３（５）：６２６７ 抗肠炎沙门氏菌单链抗体制备及其特异性分析 １ ２ １ １ １ １ １ １ 王报贵 　武晓丽 　董素琴 　甘　敏 　陈星星 　陈　飞 　明　星 　徐　锋 （１南昌大学生命科学与食品工程学院 中德联合研究院　南昌　３３００４７　２江西中医学院基础医学部　南昌　３３０００４） 摘要　目的：利用基因工程技术制备抗肠炎沙门氏菌的单链抗体。方法：从抗肠炎沙门氏菌单克 隆抗体的杂交瘤细胞中纯化ＲＮＡ，反转录后扩增出抗体的重链可变区（ＶＨ）和轻链可变区（ＶＬ） 基因片段，采用重叠延伸的方法，用柔性多肽 Ｌｉｎｋｅｒ接头（ＧｌｙＳｅｒ）按ＶＬＬｉｎｋｅｒＶＨ方式将ＶＨ ４ ３ 基因和ＶＬ基因拼接成单链抗体基因片段后，连接到ｐＧＥＸ４Ｔ１载体上，进行重组转化。挑取阳 性克隆，经ＩＰＴＧ诱导后，通过ＧＳＴ柱进行亲和层析，最后利用ＥＬＩＳＡ检测抗体的活性。结果：成 功构建了表