蛇足石杉hscas1基因克隆及序列分析-世界科学技术-中医药现代化.pdfVIP

世界科学技术— 中医药现代化★专题讨论之一：中药资源可持续利用的技术研究 蛇足石杉HsCAS1 基因克隆及序列分析＊ □罗红梅 张 鑫 牛云云 宋经元 陈士林＊＊ 中国医学科学院 （ 药用植物研究所/濒危药材繁育国家工程实验室 北京 100193） 北京协和医学院 殷秀梅 （西南大学园艺园林学院 重庆 400716） 何顺志 （贵阳中医学院药学院 贵阳 400716） 摘 要：本研究对蛇足石杉（Huperzia serrata）环阿屯醇合成酶（Cycloartenol synthase ，CAS）基因 HsCAS1 编码区进行克隆及序列分析。根据本实验室已获得的蛇足石杉转录组数据，从中获得1 条具有 环氧角鲨烯环化酶保守结构域的编码CAS 的转录本，采用RT-PCR 方法获得该基因的编码区序列，并 对HsCAS1 蛋白进行理化性质、蛋白二级结构及三维结构预测分析。利用实时荧光定量PCR 方法检测 HsCAS1 基因在蛇足石杉的根、茎、叶中的表达情况。序列分析表明，所克隆的HsCAS1 基因编码区长为 2,271 bp ，编码756 个氨基酸残基，HsCAS1 与紫果冷杉（Abies magnifica）的CAS 具有61% 的序列相似 性。生物信息学预测HsCAS1 蛋白含有3 个跨膜区，具有萜类环化酶等保守结构域，不含信号肽。 HsCAS1 在蛇足石杉的根中表达丰度高于茎和叶。本研究在国内外首次获得蛇足石杉HsCAS1 基因的编 码区序列，为进一步研究HsCAS1 在石杉科植物甾醇合成途径中的功能及鉴定酶活性位点奠定基础。 关键词：环阿屯醇合成酶 蛇足石杉 甾醇 次生代谢 doi: 10.3969/j.issn.1674-3849.2012.01.004 蛇足石杉[Huperzia serrata （Thunb.）Trev.] 又名救 我国学者从蛇足石杉中分离得到石杉碱甲（HupA），且 命王、金不换、千层塔、蛇足草，属石杉科石杉属蕨类 临床证明石杉碱甲是一种高效、高选择性的中枢乙酰 [1] 植物 。该植物在国内外均有分布，在我国主要分布于 胆碱酯酶抑制剂，具有治疗多种神经退行性疾病的潜 [2] 东北、长江流域、福建、广东、广西、云南和贵州等地区， 在作用 。 目前已研制出新药，用于临床治疗重症肌无 [2] 生于林荫下湿地、灌丛下、路旁或沟谷石上。全草入药， 力、轻度老年痴呆症等 。除生物碱类化合物外，蛇足石 [3~6] 有清热解毒、生肌止血、散瘀消肿的功效，治跌打损伤、 杉中还含有甾醇类与萜类化合物 。 瘀血肿痛、内伤出血，外用治痈疗肿毒、毒蛇咬伤、烧烫 植物甾醇，又称植物固醇，是多种激素及甾族化合 伤等。生物碱是其主要的有效成分。20 世纪80 年代， 物合成的共同前体，具有降血脂、抗肿瘤、防治前列腺肥 [3，7] 大、抑制乳腺增生和调节免疫等药理活性 。在植物中， 收稿日期：2012-01-13 甾醇类化合物与萜类化合物的生物