高致病性猪蓝耳病rt-pcr检测技术.pdfVIP

ICS 11.220 B41 DB33 浙 江 省 地 方 标 准 DB 33/T XXXXX—2011 高致病性猪蓝耳病RT-PCR 检测技术 RT-PCR detection technique for highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus （报批稿） 2011 - XX - XX 发布 2011 - XX - XX 实施 浙江省质量技术监督局 发 布 DB33/T XXXXX—2011 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009 《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》和GB ／T 20001.4-2001 《标准编写规则 第4部分：化学分析方法》进行编制。 本标准由浙江省农业厅提出。 本标准由浙江省畜牧兽医标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：浙江省动物疫病预防控制中心、中国动物卫生与流行病学中心。 本标准起草人：徐辉、李晓成、吴发兴、赵灵燕、张燕霞、倪柏锋、周彩琴、陆国林、吴赟竑、陈 星宇、王燕萍、周蕾。 I DB33/T XXXXX—2011 高致病性猪蓝耳病RT-PCR 检测技术 1 范围 本标准规定了高致病性猪蓝耳病病毒RT-PCR检测技术。 本标准适用于猪只感染高致病性和美洲型经典猪蓝耳病病毒的检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 高致病性猪蓝耳病 highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome 简称HP-PRRS，是由猪繁殖与呼吸综合症（Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS） （俗称蓝耳病）病毒变异株引起的一种猪的急性高致死性疫病。临床上以体温明显升高，可达41℃以上； 眼结膜炎、眼睑水肿；咳嗽、气喘等呼吸道症状为特征；部分猪出现后躯无力、不能站立或共济失调等 神经症状。PRRSV是套式病毒目、动脉炎病毒科、动脉炎病毒属成员。 3.2 逆转录-聚合酶链反应 reversi transcriptase polymerase chain reaction ，RT-PCR 将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA 合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。 4 缩略语 下列缩略语适用于本标准。 bp base pair，碱基对。 DNA deoxyribonucleic acid，脱氧核糖核酸。 dNTPs Deoxyribonucleoside Triphosphates，脱氧核糖核苷三磷酸。 IFA immunofluorescence assay，免疫荧光测定。 PCR polymeras