综合设计性实验-化学抑杀菌剂的效果评价.pptxVIP

;一、前言;（二）实验原理 1.抗生素的特点 （1）作用机理的选择性 抑制细胞壁合成：青霉素、头孢菌素 干扰细胞膜（破坏膜的选择透过性）：多粘菌素、杆菌肽 抑制蛋白质合成：与核糖体50S亚基（氯霉素，红霉素）或30S亚基结合（卡那霉素、链霉素、四环素） 抑制核酸合成： 抑制DNA复制（丝裂霉素） 抑制RNA转录或合成（放线菌素D、利福平） 抗菌效果：抑菌、杀菌和溶菌 ;（2）对微生物有选择性 青霉素对多种革兰氏阳性细菌都有良好药效； 链霉素对多种革兰氏阳性和阴性细菌都有良好药效，对结核杆菌有特殊的疗效； 氯霉素、四环素、金霉素、土霉素对G-和G+、立克次氏体、衣原体均有作用，属于广谱型抗生素； 放线菌酮、两性霉素B、灰黄霉素对真菌有抑制作用。 （3）一般都在很低浓度下就对病原菌发生作用 有效浓度：抑制微生物生长的最低浓度。 低强度抗生素：有效浓度≥100 mg/L 高强度抗生素：有效浓度≤1 mg/L;2.消毒剂 可以抑制或杀灭微生物，但对人体也可能产生有害作用的化学试剂，主要用于抑制或杀灭物体表面、器械、排泄物和周围环境中的微生物，不能用于活细胞或体内治疗用。 作用机理：蛋白质变性、损伤细胞膜、氧化作用 3.防腐剂 可以抑制微生物生长，但对人体或微生物的毒性较低的化学试剂。常用于皮肤、黏膜、伤口等处的防止感染，也可用于食品、饮料、药品的防腐。;4.研究方法 可以通过扩散法（滤纸片法、牛津杯法）、比浊（测吸光值）等方法检测不同抑杀菌剂的作用。 滤纸片法 适用条件——不易挥发的化学药剂 测定抑菌圈直径大小，抑菌圈直径越大，该消毒剂的杀菌能力越强。 注意事项——滤纸片大小一致（6mm）、滤纸片吸附量一致（本实验采取浸泡法来保证滤纸片吸附量一致）、菌苔均匀。 比浊法 在一定范围内，微生物细胞浓度与透光度呈反比，与光密度呈正比。而光密度或透光度可以通过光电池测出。通过对比不同抑菌剂作用的同一菌液的光密度或透光度而比较出不同抑菌剂的作用效果好坏。 ;二、材料与方法;(二)实验方法 滤纸片法：选几种药剂（及浓度）进行 无菌操作下将灭过菌且冷却至50℃左右的培养基倒入无菌培养皿（约15ml）。待其凝固后用移液枪移取0.1ml菌悬液，然后用无菌涂布棒将菌悬液涂布均匀，制成含菌平板，备用。在无菌条件下，将灭菌后直径为6mm的滤纸圆片在待测药剂中浸泡至少5min后取出，自然沥干后贴在含菌平板上，每皿放六片，以无菌水作对照，置于37℃培养箱中培养24h。用十字交叉法测量抑菌圈直径，取平均值。 判定标准： 抑菌圈直径大于6mm者判定为有抑菌作用，无菌水对照组应无抑菌作用。 ;(二)实验方法 比浊法 在一定范围内，微生物细胞浓度与透光度呈反比，与光密度呈比。而光密度或透光度可以通过光电池测出。 可用分光光度法对物色的微生物悬浮液进行测定，一般选用450~650nm波段。 牛津杯法 将熔化琼脂培养基冷却至50℃，加入适量的测试菌悬液与琼脂培养基混匀，吸取15ml置平皿内，待凝固后，将牛津杯放置平皿菌层上，每杯加入供试样药液30ul，然后将平皿盖好，置于37℃温箱中培养24h，用游标卡尺测量平皿内抑菌圈直径。 ;(二)实验方法 本实验采取滤纸片法，操作步骤如下： 1.配制牛肉膏蛋白胨培养基 牛肉膏5g、蛋白胨10g、NaCl 5g、琼脂15-20g、水1000ml pH7.0-7.2，121℃ 灭菌20min 2.所需用品的灭菌及配制药剂稀释液 3.制大肠杆菌、白色葡萄球菌菌悬液 用灭菌后的生理盐水稀释菌种并摇匀。注意：每次移液枪取菌液前均需摇匀。 4.涂板 用移液枪准确移取100ul菌液于培养基表面，用灭菌后的涂布棒将菌液涂抹均匀。 5.贴浸有药剂的滤纸片 含药剂滤纸片贴到涂菌的平板表面，每浓度浸泡至少5min，每平板贴7片，中间为对照37℃培养16~20h 6.测抑菌圈直径 大于滤纸片直径1mm以上的最低浓度视为最低抑杀菌浓度。;　;实验结果与分析;在不同龙胆紫浓度中大肠杆菌的平均直径 0.10%：10mm 0.05%:7mm;不同浓度碘酒对大肠杆菌的抑制作用 0.50%：9mm 0.25%：8mm;5、6、7（浓度依次增加）表现出不同浓度氨苄青霉素对白葡萄球菌的影响 8、9、10（浓度一次增加）表现出不同浓度链霉素对白葡萄球菌生长的影响 ;11、12、13（浓度依次增加）表现出不同浓度卡那霉素对大肠杆菌的影响 14、15、16（浓度一次增加）表现出不同浓度四环素对大肠杆菌生长的影响 ;大肠杆菌： 在双黄连口服液