《基因工程的基本操作程序》(新人教版选修).pptVIP

* * 基因工程的基本操作程序 基因工程基本操作的四个步骤： 目的基因的获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测与鉴定 一、目的基因的获取 1、目的基因的来源 2、获取目的基因的常用方法 ①从自然界已有的物种分离 ②人工方法合成 ①从基因文库中直接获取 ②如果需要大量的目的基因，需要对目的基因进行PCR技术扩增 （一）从基因文库中直接获取 按照外源DNA片段的来源： 从特定组织提取的染色体基因组DNA ---基因组DNA文库（总） mRNA反转录成的cDNA拷贝----cDNA文库（部分） ②基因文库的目的 为了在不知目的基因序列的情况下，便于获得所需的目的基因。 ①基因文库的分类 限制酶 基因组DNA 基因重组 转化细菌 体外包装 （一）从基因文库中直接获取 基因组文库 （一）从基因文库中直接获取 1.基因文库 基因重组 反转录酶 mRNA cDNA 2.部分基因文库 （二）利用PCR扩增目的基因 1、过程 高温变性（解旋为单链） 低温退火（引物与单链互补结合） 适温延伸（在Taq酶的作用下合成 与模板互补的DNA双链） 重复循环 1、过程 （二）利用PCR扩增目的基因 （二）利用PCR扩增目的基因 2、条件 已知基因的核苷酸序列、 四种脱氧核苷酸、 引物 TaqDNA聚合酶 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增 4、结果 耐高温 3、方式：以指数方式扩增，即____（n为扩增循环的次数） 2n 适宜的温度和PH值 思考：作为基因工程表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？为什么？ 2、构建过程 目的基因 启动子 终止子 标记基因 复制原点 1、基因表达载体的组成 想一想：其中有两个DNA片段连接形成的的产物有几种？ ①载体与表达载体的区别：二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构 ②用到的工具酶：既用到限制酶切割载体，又用到DNA连接酶将目的基因和载体拼接，两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键 ③启动子、终止子对于目的基因表达必不可少 ④目的基因不能单独进入受体细胞，必需以表达载体的方式携带进去。 注意 1、导入植物细胞 ①农杆菌转化法: 表达载体导入农杆菌，再 让农杆菌感染植物细胞 ②基因枪法 ③花粉管通道法 显微注射法：将基因表达载体提纯，用显微仪 注射到受精卵中 2、导入动物细胞 3、导入微生物细胞 ①原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质少 用Ca2+处理细胞 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子 ②方法： 1、分子水平的检测：分子杂交技术 ①检测是否插入目的基因 ②检测是否转录出mRNA ③检测目的基因是否翻译 成蛋白质 2、个体水平的鉴定 DNA分子杂交技术 抗体与相应的蛋白质进行抗原－抗体杂交，看是否有杂交带 分子杂交技术 四、目的基因的检测与鉴定