传染性法氏囊病病毒VP3抗原表位的鉴定.pdfVIP

中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会论文集 传染性法氏囊病病毒VP3抗原表位的鉴定。 邓小芸，高玉龙，高宏雷，祁小乐，王笑梅#1 (中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室， 黑龙江哈尔滨150001) bursal disease， 传染性法氏囊病(Infectous bursal IBD)是由传染性法氏囊病病毒(Infe!ctious1材料与方法 diseasevirus，IBDV)引起的以侵害雏鸡中枢免疫器1．1材料抗IBDV VP3单克隆抗体HRB一3F、 官一法氏囊为主要特征的传染病。IBDV属双RNA 病毒科禽双RNA病毒属，基因组包括大(A)小(B)pUCl8GxA重组质粒(将IBDVGx基因组的A节 两个节段，编码五种病毒蛋白：VPl、VP2、VP3、VP4 段克隆到pUCl8载体)由哈尔滨兽医研究所免疫抑 和VP5。VPl由B节段编码，具有依赖RNA的制病课题组制备；原核表达载体PET一32a、感受态 RNA聚合酶活性。其它四种病毒蛋白由A节段编细胞DH5a、DE3均为本实验室保存；限制性内切 码，VP4为病毒自身蛋白酶，VP5的功能尚不明酶、T4DNA连接酶等均为宝生物工程(大连)有限 确[h纠，VP2和VP3是病毒的主要结构蛋白，构成 病毒衣壳。虽然VP2是IBDV主要的毒力基因，也 是构象表位的集中区，但越来越多的证据佐证了 Sigma公司产品；质粒小提试剂盒、凝胶回收试剂盒 VP3也是IBDV重要的毒力基因[3]。VP3基因位于 为华舜生物工程有限公司产品，BALB／c鼠购自哈 IBDV 尔滨兽医研究所动物房。 A节段的2390--3169位，全长780bp。这个内 衣壳蛋白有两个相互作用域：与基因组双链RNA 1．2 的相互作用域在该蛋白的上游，与VPl结合域在该 Protean软件对IBDV 蛋白的C末端，这些相互作用对病毒的组装十分重 要I‘] 质、亲水性、可塑性、表面可及性及抗原性)等方面进 抗原表位作图是IBDV分子生物学研究的重要行分析，预测其抗原表位，根据预测结果设计4条覆 组成部分，对疾病的诊断、设计无毒副作用的多表位 盖VP3全长的重叠短肽：P1一P4；根据检测结果， 疫苗以及免疫治疗试剂等具有积极的意义。迄今， 又设计3条不重叠短肽：P5一PT；最后为了精确定 IBDV VP2蛋白抗原表位研究已有详细的报道：主 位四株单抗的抗原表位，分别设计覆盖P5和P7全 要集中于两个亲水区[5_9]。VP3抗原表位的研究还 停留在大片段(58个氨基酸)的水平n…，制约了利用OLIG06．0软件设计相应的引物，引物的57端 IBDV表位作图的完成。所以，把VP3的抗原表位和3’端分别引入EcoRI和SalI位点，由上海博亚 进一步精确定位到更短的范围内很有必要。 生物工程公司合成。 本研究设计表达了17个部分重叠且覆盖VP31．3预测表位的克隆、融合表达和纯化以 全长的短肽融合蛋白，用4株抗IBDVVP3的单克 隆抗体对短肽融合蛋白组进行扫描，结果鉴定出了 增相应基因片段，扩增条件：94℃预变性5min； VP3的111—121aa和 两个线性抗原表位：IBDV 179—192aa，进一步揭示了VP3的抗原结构，为阐 明IBDV的发病机理、免疫抑制机理及多表位疫苗物与载体PET一32a分别经EcoRI和SalI酶切 的设计奠定了基础。 后，连接，转化感受态细胞DH5a，经过酶切、PCR、 ·基金项目：国家973项目。