人脱细胞软骨细胞外基质对异种软骨种子细胞的影响-中国医药生物技术.PDF

中国医药生物技术 2014 年 4 月第 9 卷第 2 期 Chin Med Biotechnol, April 2014, Vol. 9, No. 2 81 DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2014.02.001 ·论著· 人脱细胞软骨细胞外基质 对异种软骨种子细胞的影响 高钺，刘舒云，黄靖香，郭维民，陈继凤，张莉，赵斌，彭江， 汪爱媛，王玉，许文静，卢世璧，郭全义 【摘要】 软骨组织工程大量应用的瓶颈[1] 。目前软骨组织最 目的 观察人脱细胞软骨细胞外基质（hACAM ）对异种兔 常用的细胞外支架材料为人工合成材料：如聚羟基 软骨种子细胞增殖和表型的影响。 乙酸（polyglycolic acid ，PGA ）、聚乳酸（polylactic 方法 将差速梯度离心法制作的人脱细胞软骨细胞外基质， acid、PLA ）等。但由于人工合成材料本身为异物， 配制成 0.5% 的浆料，分别铺于 6 孔细胞培养板和 96 孔 有可能导致过敏、感染等问题[2] 。比起人工合成的 细胞培养板，形成 1 mm 厚的薄膜，以此培养板为实验组。 支架材料，人脱细胞软骨细胞外基质（human 空白对照组培养板仅使用单纯培养液培养。在培养板上培养 articular cartilage acellular matrix，hACAM ）用优选 兔关节软骨细胞。通过 hochest33258 染色验证人软骨细胞 的方法脱去了具有免疫原性的细胞，保留了大量对 外基质脱细胞完全与否；分别在第 5 、15 天两个时间点， 细胞黏附、增殖有利的蛋白多糖和 II 型胶原等， 通过倒置显微镜、甲苯胺蓝染色观察两种培养方法的兔软骨 该基质在经过处理做成支架以后的力学性质与天 细胞的生长形态、细胞表型和增殖情况，用 CCK-8 细胞增 然的软骨也很相近[3] ，而且还具有能提供对细胞黏 殖实验比较两种培养方法在第 1 、3、7、10 天的增殖情况。 附有益的信号分子[4] 。有实验研究证实脱细胞耳软 结果 通过 hochest33258 染色发现差速梯度离心的人软骨 骨基质可以促进同种耳软骨种子细胞增殖，而且可 [5-6] 细胞外基质脱细胞完全。通过倒置显微镜观察第 5 和 15 以修复耳软骨缺损 ，因此，我们认为人关节软骨 天的实验组细胞增殖情况优于空白对照组，甲苯胺蓝染色的 的 hACAM 也能对兔软骨种子细胞增殖和表型维 结果也证明这个观点；CCK-8 细胞增殖试验显示第 7 天 持起到一定的作用，本实验的目的在于探索 hACAM 组在细胞增殖方面明显地优于单纯培养液的对照 hACAM 对异种软骨种子细胞的影响[7] 。 组（P = 0.0298 ），hACAM 组的软骨细胞与空白组的软骨细 胞在第 10 天的增殖情况相比没有统计学差异。 1 材料与方法 1.1 材料 结论 hACAM 免疫原性低，无细胞毒性，能够很好地促进 1.1.1 试剂和仪器 小鼠抗人 II 型胶原蛋白抗 异种软骨细胞的增殖。 体购自北京世安科兴科技公司；BCPCAS 4800 型 【关键词】 细胞外基质； 软骨； 软骨细胞； 组织 扫描电子显微镜、低温高速离心机为美国贝克曼公 工程； 细胞增殖 司产品；IX70-121 型荧光显微镜为日本 Olympus 中国医药生物技术, 2