鸡贫血病毒结构蛋白单克隆抗体制备及抗原表位初步分析.pdfVIP

中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会论文集 鸡贫血病毒结构蛋白单克隆抗体制备及抗原表位初步分析· 王晓艳1，高宏雷1，高玉龙1，程宇2，王笑梅” (1．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，兽医生物技术国家重点实验室， 禽传染病实验室，哈尔滨150001；2．新疆农业大学，乌鲁木齐830052) anemia 鸡贫血病毒(Chickenvirus，CAV)为圆 对该病进行诊断。因此，作为病毒的结构蛋白，VPl 环病毒科(Cireoviridae)环形病毒属(Gyrovirus)的在CAV免疫及诊断方面所起的作用还需深入研 代表成员[1]，也是引起鸡群免疫抑制的一个重要病 究。 原体。该病毒可以由种蛋垂直传播给子代，从而导致 VPl为纯化的CAV粒子中唯一能见到的蛋 2周龄以内无母源抗体的幼鸡患病，该病以淋巴萎 白，作为病毒的主要结构蛋白，其在疫苗及诊断试剂 缩、贫血为特征，主要损害中枢免疫器官，从而导致 开发方面有重要作用，而单抗则成为实现这些目标 免疫抑制[2’3“]。该病感染成年鸡，一般不引起临床 的必要工具。因此，我们制备了针对CAV结构蛋白 症状，但可以导致疫苗免疫失败及鸡群对其它烈性 VPl．．的特异性单抗，为该病特异性诊断方法的建立 传染病(如新城疫、禽流感等)易感性增加[s,6,73，从及该病的相关研究奠定了基础。同时，利用现有的单 而给养禽业带来巨大经济损失。目前，该病几乎遍布 抗对VPl的B细胞表位进行了初步鉴定，这为了解 世界上所有养禽国家，给养禽业带来巨大经济损失。 VPl的结构与功能奠定了一定基础。 CAV为无囊膜病毒，其基因组结构简单，为单 1材料与方法 股、环状DNA，约2．3kb，由三个开放阅读框构成， 1．1菌株、毒株与细胞、试剂CAVM9905毒株由本 主要编码三种蛋白，即VPl、VP2和VP3。其中VPl 为病毒的主要衣壳蛋白，存在于高度纯化的病毒颗 实验室分离、保存；免疫及表位鉴定用分段表达菌株 粒上，其N末端含大量碱性氨基酸，与组蛋白有一 骨髓瘤细胞由本实验室保存；Balb／c鼠购于中国农 定相似性[8]，作为病毒的主要结构蛋白，VPl在刺激 机体产生中和抗体方面起重要作用，但是Koch等业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物中心；弗氏完 人[9]研究发现VPl只有与VP2共同表达时，才可 以刺激机体产生中和抗体，由于在纯化的病毒颗粒 兔抗鼠IgG酶标结合物、HRP一兔抗鸡IgG酶标结 中只有VPl，未发现VP2的存在，所以人们推测 公司；96孔聚乙烯板、胎牛血清、HAT、HT及 VPl的表位以构象型表位为主，而VP2只是辅助 VPI折叠形成正确的构象[1¨。利用现有的具有中和 活性的单克隆抗体进行的免疫印迹实验也证明了 亚型鉴定试剂盒购于Persen公司。 VPl的中和性表位为构象依赖性的。但是，当用杆 1．2免疫原制备及动物免疫大量诱导构建的菌株 状病毒表达系统表达的VPl作为免疫原免疫鸡群 时，获得的血清也具有较弱的中和活性[1川。国内也 Biosciences公司的HisTrapTM试剂盒进行纯化， 有报道重组的VPl蛋白可用作抗原检测鸡群感染 操作按说明书进行。将纯化的目的蛋白经紫外分光 光度计定量后，与等量弗氏完全佐剂乳化后，背部皮 CAV后的抗体[11,123，而利用重组蛋白制备的抗血清 下多点注射8周龄的Balb／e鼠，50 也可用作免疫荧光实验的抗体来检测抗原[13。，从而 ug／只，以后每 ·作者简介：王晓艳(1977一)，女，博士研