非转座子载体介导的转基因家蚕表达hil鄄28a-生物化学与生物物理.pdfVIP

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 201 1, 38(8): 724~729 非转座子载体介导的转基因家蚕表达hIL 28A* 1)** 1)** 2) 1) 1)*** 崔琳琳 薛仁宇 陆 叶 曹广力 贡成良 1) 2) ( 苏州大学基础医学与生物科学学院，苏州215123 ； 苏州大学药学院，苏州2 15123) 摘要 为了探讨非转座子载体介导转基因家蚕表达外源基因的可能性，将h - 克隆进昆虫细胞表达载体pIZT/V5-His， IL 28A 构建了重组载体pIZT/V5-His-hIL-28A 利用精子介导法将该重组载体导入家蚕卵，通过绿色荧光筛选并结合PCR、DNA 杂 交等分子鉴定，证实成功获得了转基因家蚕 Western blotting 结果显示，转基因家蚕表达重组hIL-28A 的分子质量为25 ku ， ELISA 检测结果显示，hIL-28A 在G3 代转基因蚕、后部丝腺、脂肪组织冻干粉中的含量分别为0.198、0.320 和0.238 ng/g 表明通过非转座子载体介导可以将外源基因导入家蚕基因组并实现外源基因的表达 关键词 非转座子载体pIZT/V5-His，转基因家蚕，h - ，精子介导法 IL 28A 学科分类号 Q756 DOI: 10.3724/SP.J.1206.2010.00690 家蚕转基因研究经过20 多年的发展，在技术 源基因的载体，该载体属非转座子、非打靶类载 和方法上已经取得很大进步 制备转基因蚕常用的 体，同时该载体含有5 个组氨酸标签，通过His 载体主要有两类：一类是基于转座子的转基因，如 柱，可以相对方便地将融合表达的外源蛋白分离纯 p iggyBac 、minos 等 应用较为成熟的是p iggyBac 化 李曦、陈慧梅等分别利用该载体获得了稳定表 转座子，自从2000 年p iggyBac 转座子成功用于转 达人粒细胞- 巨噬细胞集落刺激因子的家蚕BmN [1] [10-11] 基因家蚕以来 ，已通过家蚕转基因成功表达了血 细胞系 ，但至今还没有使用pIZT/V5 载体进行 [2] [3] 包括家蚕在内的昆虫转基因研究报道，因此使用该 清白蛋白 、人粒细胞- 集落细胞刺激因子 、成纤 [4] [5] 维细胞生长因子 、hIGF- 等多种外源蛋白 另 载体进行转基因家蚕的研究值得尝试 一类是基于基因打靶系统的转基因，也称基因定点 IL-28A 是 2003 年美国科学家 Kotenko 和 [12-13]