日本血吸虫核糖体蛋白s4基因的克隆表达纯化及免疫诊断价值的初步.pdfVIP

·500· 生堡亟陵匡堂盘查!Q!Q生垒旦箜竺鲞筮鱼翅鱼堑!』里塑丛鲤：地堡垫!Q，!些坐：盟垒垒 ．论著． 日本血吸虫核糖体蛋白S4基因的克隆、表 达、纯化及免疫诊断价值的初步研究 高冬梅汪世平余路新何卓陈秀春 【摘要】 目的体外重组日本血吸虫核糖体蛋白S4(SjRPS4)，并评价其在日本血吸虫病免疫诊 断中的应用价值。方法 从日本血吸虫尾蚴eDNA文库获得了踮Ps4蛋白相关基因，将该段基因克 隆入pQE30表达载体并转化到大肠杆菌M15中，异丙基-B-D—硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白表 达。融合蛋白经Ni“-NTA树脂柱进行亲和层析纯化，并通过十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS)鉴定蛋白反应，通过Westernblot和ELISA对其免疫原性进行鉴定。结果成功构建了 pQE30／SjRPS4重组菌。重组菌诱导培养后，SDS电泳分析可见在相对分子质量约30×103处 有驰Ps4融合蛋白的表达，经纯化获得纯度达90％以上的表达蛋白。Westernblot检测结果表明该 重组蛋白能被日本血吸虫病患者血清识别。用ELISA法检测疑似血吸虫病患者血清，敏