离心柱型-深圳中联生物科技开发有限公司.docVIP

深圳市中联生物科技开发有限公司 ZL Biotech Corporation 地 址：深圳市南山区桃源街道留仙大道1183号南山云谷创新产业园综合服务楼506-508 电 话：0755传真：0755-8655 0193 网 址：  一般实验室使用，仅用于体外 基因组和RNA分提试剂盒 （离心柱型） 用于快速提取各种动植物细胞/组织基因组和RNA 目录号：RP5501（50次） RP5502（100次） 使用手册 2008年11月，第1版 深圳市中联生物科技开发有限公司 ZL Biotech Corporation  一、试剂盒组成、储存、稳定性 试剂盒组成 保存 50 次（RP5401） 100 次（RP5402） 裂解液 DLS 室温 55 ml 110 ml 去蛋白液 RE 室温 60ml 120ml 漂洗液 RW 4℃（一个月） 25 ml 50 ml -20℃（长期） 第一次使用前按说明加指定量乙醇 RNase-free H2O 室温 20ml 40ml 70%乙醇 室温 45ml RNase-free H2 O 90mlRNase-free H2 O 第一次使用前按说明加指定量乙醇 RNase-free 室温 50 个 100 个 吸附柱 RA RNase-free 室温 50 个 100 个 吸附柱 RB 收集管（2ml） 室温 100 个 200 个 本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。 注意事项 1． 第一次使用前请先在漂洗液 RW 瓶和 70%乙醇瓶中加入指定量乙醇，加入后请及时 打钩标记已加入乙醇，以免多次加入! 2． 所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使 用，可在 37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。 3． 不合适的储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输 和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。 4． 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH 值变化，各溶液使用后应及时盖 紧盖子。 5． 裂解液 DLS 使用前加入 β-巯基乙醇至终浓度 4%。 -1- 六、疑难解答（Trouble shooting） 出现的问题 可能的原因 建议解决方法 产量低 样品裂解或者匀浆不彻底 液氮研磨的时候尽量研磨完全， 加入裂解液 DLS 后剧烈震荡或者 用枪头吹打帮助裂解。匀浆步骤 可以提高产量。新鲜组织或者植 物组织可以不需液氮，直接在干 净研钵内加入适量裂解液 DLS 直 接研磨。 使用的样品或者裂解物在 存放时间过长可能降低 RNA 产 －20℃或者－70℃存放太 量，应尽快的处理样品或者裂解 久 物。 组织本身含 RNA 少 不同类型的组织和细胞含有不同 量的 RNA,对于含量少的组织应 该适当提高起始处理量。 超过了吸附柱的最大吸附 同一个样品使用多个吸附柱，然 能力 后合并得到 RNA。 去蛋白液 RE 和漂洗液 第一次实验时，漂洗液 RW 瓶和 RW 内忘记加乙醇 70%乙醇瓶中加入指定量无水乙 醇。 OD260 /OD280 吸光度比 分光光度计检测吸光度 检测时用 TE 稀释样品 值1.6 时，RNA 样品不是溶于 TE，而是溶于水。低离子 浓 度 和 低 pH 条 件 下 ， OD280 值会较高，造成比 值低。 -6-  接前表 出现的问题 可能的原因 建议解决方法 污染了蛋白或者苯酚 RNA降解，完整性不 RNA 提取所用各种物品 按照注意事项准备 RNA 提取的各种 佳 和试剂没有灭活 RNA 酶 用品。 组织取出后没有马上处理 组织应该尽量立刻处理，不能及时处 或冷冻，提取前已经降解 理的应该尽快保存于液氮或者－ 70℃。 提取的 RNA 样品没有保 尽可能的将 RNA 保存在－70℃的低 存在－20℃或－70℃低温 温。 样品提取过程中降解 提取动作应该尽可能的快，离心应该 低温进行，取用 RNA 时尽量冰上进 行。 下游的RT-PCR实验 忘记做步骤 11，或者将吸 确保做了步骤 11，然后小心取出吸 不成功 附柱