内蒙古绒山羊毛囊兴盛期皮肤cdna文库的构建及kap2cdna的克隆.pdfVIP

维普资讯 动 物 学 研 究 2004，Apr．25(2)：166—171 CN53—-lo4o／Q ISSN0254—-5853 ZoologicalResearch 内蒙古绒山羊毛囊兴盛期皮肤 cDNA文库 的构建及 KAP6．2cDNA的克隆 尹 俊 ，一，扈庭茂。，李金泉 ，，张春兰 ，郭志成 ，周欢敏 (1．内蒙古农业大学生物工程学院，内蒙古 呼和浩持 010018；2 内蒙古大学 生命科学学院，内蒙占呼和浩特 010021； 3．内蒙古农业大学动物与医学学院，内蒙 占呼和浩特 010018；4 内蒙古农业大学生态环境学院，内蒙古 呼和浩特 010018) 摘要：用SMART技术构建了绒山羊 (Caprahircus)毛囊兴盛期皮肤组织的cDNA质粒文库。TrizolReagent (G1BCO／BRL)分离RNA后，用Oligotex(QIAGEN)提取 mRNA；以锚定引物反转录合成 cDNA第一链作为模 板，以2个锚定引物，用长链 PCR扩增全长 cDNA双链 。CHROMASPIN一400去除小片段后用 I酶切 ，连接 到 I消化的pBluescriptⅡSK (带有 IA和B两个位点)质粒载体中，转化E．coli5a，库容量为 1．8× 10sclones。随机挑选克隆提取质粒，5测定插入片段的核苷酸序列，与GenBank数据库比对后发现 1个 KAP6—2 cDNA，序列号为AY316158。绒山羊KAP6—2由675个核苷酸组成，编码 96个氨基酸，具有高甘氨酸／酪氨酸 HGTps与富含半胱胺酸蛋白之间的中间特征、 关键词：内蒙古绒山羊；KAP6—2；全长 cDNA 中图分类号：Q959．842 文献标识码 ：A 文章编号：0254—5853(2004)02—0166—06 ConstructionofaSkincDNA LibraryofCashmereGoat andCloningofKAP6-2·Full-·lengthcDNA YINJun ，，HUTin．mao ，kIJin—quan， ．ZHANG Chun—lan3． GUO Zhi—zheng ，ZHOU Huan—m in (1．CollegeofBiotech~mlogy，lnwerMong,,liaAgricuhuralUniversity，Huhhot 010018，China； 2．CollegeofZ Science，InnetMongoliaUniversity，Huhhot 010021，Chimt； 3·CollegeofAnimalScienceandMedicalie‘rwe，InnerMongolia4gricuhuralUniversit)，Huhhot 010018，Chp,“： 4．CollegeofEcosystemEnvironment，InnetMongoliaAgriculturalUniversity，Huhhot 010018，China) Abstract：Inordertounderstandthemolecularmechanism ofthecharacteristicofcashmere．weconstructedacD— NAlibraryusingtheSMARTcDNA