卵磷脂的提取与鉴定一试验目的了解用乙醇作为溶剂提取卵磷脂的.docVIP

卵磷脂的提取与鉴定 一 实验目的 了解用乙醇作为溶剂提取卵磷脂的原理和方法。 二 实验原理 卵磷脂在脑神经细胞中含量很高，蛋黄中含有特别高。根据卵磷脂溶于乙醇、乙醚等有机溶剂进行提取。新提取的卵磷脂为白色蜡状物，与空气接触后被氧化为黄褐色。利用卵磷脂的胆碱基在碱性溶液中可以分解为三甲胺（特殊的鱼腥臭味）进行鉴别。 三 实验器材与试剂 鸡蛋黄、乙醇（95％）、10％NaOH、烧杯、量筒等。 四 实验步骤 1 提取卵磷脂 取2g蛋黄于15mL（95％）乙醇，过滤、蒸气浴蒸干，残留物为卵磷脂。 2 鉴别 取少量的卵磷脂于试管中，加10％NaOH溶液2mL，水浴加热是否产生鱼腥臭味。 五 注意事项 滤液要清。 六 作业 完成实验报告，写出实验小结。 粗脂肪的提取和定量测定——索氏提取法 一 实验目的 1 学习和掌握用索氏提取器提取脂肪的原理和方法 2 学习和掌握用重量分析法对粗脂肪进行定量测定。 二 实验原理 利用脂类物质溶于有机溶剂的特性，在索氏提取器中用有机溶剂对样品中的的脂类物质进行提取。因提取的物质是脂类物质的混合物，故称其为粗脂肪。 三 实验器材 1索氏提取器 2 分析天平 3 烧杯 4 恒温水浴锅 5 脱脂棉和脱脂滤纸 6 镊子 7 干燥器 四 实验试剂与材料 1 样品 2 石油醚 五 实验步骤 1称量索氏提取瓶 将索氏提取瓶洗净烘干至恒重，记录重量。 2提取样品粗脂肪 将石油醚加到提取瓶内约为瓶容积1/2—2/3。将样品包放入提取管内。连接索氏提取器各个部分。用70度－80度恒温水浴加热提取瓶，抽提进行2―3小时，直至提取管内的石油醚用滤纸检验无油迹为止，表示提取完全。 3 计算样品中粗脂肪的含量 提取完毕，取出滤纸包，再回馏一次，倒出石油醚。取下提取瓶，洗净瓶的外壁，烘干至恒重。记录重量。 按照下式计算样品中粗脂肪的百分含量。 粗脂肪（％）＝（提取后提取瓶的重量－提取前提取瓶的重量）/样品重量*100% 六 作业 计算样品中粗脂肪的含量，完成实验报告。 思考题： 做好本实验应注意哪些事项？ 氨基酸的分离鉴定――纸层析法通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。层析溶剂由有机溶剂和水组成。物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值(比移)来表示的：Rf = 原点到层析中心的距离 / 原点到容剂前沿的距离在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。本实验利用纸层析法分离氨基酸1、层析缸2、毛细管3、喷雾器4、培养皿5、层析滤纸(新华一号)1、扩展剂650mL） 是4份水饱和的正丁醇和1份醋酸的混合物。将20 mL正丁醇和5 mL冰醋酸放人分液漏斗中，与15mL水混合，充分振荡，静置后分层，放出下层水层。取漏斗内的扩展剂约5mL置于小烧杯中做平衡溶剂，其余的倒人培养皿中备用。2、氨基酸溶液0．5％的赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸溶液及它们的混合液(各组份浓度均为0．5％)各5mL3、显色剂 50～lOOmL％水合茚三酮正丁醇溶液。1、将盛有平衡溶剂的小烧杯置于密闭的层析缸中。2、取层析滤纸(长22 cm、宽14 cm)一张。在纸的一端距边缘2～3 cm处用铅笔划一条直线，在此直线上每间隔2cm作一记号。3、点样用毛细管将各氨基酸样品分别点在这6个位置上，干后再点一次。每点在纸上扩散的直径，最大不超过3 mm。4、扩展用线将滤纸缝成筒状，纸的两边不能接触。将盛有约20 mL扩展剂的培养皿迅速置于密闭的层析缸中，并将滤纸直立于培养皿中(点样的一端在下，扩展剂的液面需低于点样线1 cm)。待溶剂上升15―20 cm时即取出滤纸，铅笔描出溶剂前沿界线，自然干燥或用吹风机热风吹干。5、显色 用喷雾器均匀喷上0。1％茚三酮正丁醇溶液，然后置烘箱中烘烤5分钟(100℃)或用热风吹干即可显出各层析斑点。6、计算各种氨基酸的Rf值。计算各种氨基酸的Rf值、何谓纸层析法?2、何谓及f值?影响只f值的主要因素是什么?3、怎样制备扩展剂?4、层析缸中平衡溶剂的作用是什么? 清蛋白 球 蛋 白 α1 α2 β γ 等 电 点 4.88 5.06 5.06 5.06 6.85-7.3 分子量（万） 6.9 20 30 9-15 15.6-30 其电泳图谱如下 清蛋白 α1 α2 β γ 点样 三 实验器材 1．试管及试管架； 2．刻度吸管或移液器；3．微量加样器（或1×5㎝ 胶片）； 4．培养皿；5．染色缸、洗脱缸； 6．剪刀、镊子；7． 滤