分子生物学三讲.pptVIP

教学要求: 1. 理解DNA复制的半保留机制和半不连续复制 2. 掌握细菌DNA复制过程及有重要作用的酶和蛋白质 3. 掌握真核生物DNA复制的特点 4. 掌握DNA复制的类型 Semi-conservative mechanism (半保留机制) DNA 双链解开，以单链做模板，碱基互补原则，各自合成一条子链 During replication, the two parental strands separate and each acts as a template to direct the enzyme-catalyzed synthesis of a new complementary daughter strand following the normal base-pairing rules. DNA半保留复制的生物学意义： DNA的半保留复制表明DNA在代谢上的稳定性，保证亲代的遗传信息稳定地传递给后代。 replication forks(复制叉): 在复制启动时，尚未解开螺旋的亲代双链同新合成的两条子代双链DNA的交界处。 replication bubbles(复制泡)：两个靠得很近的复制叉之间形成的空间。 semi-discontinous replication (半不连续复制) DNA复制反应的共同特点 半保留复制 半不连续复制 有特定的复制起点 需要引物 复制真实性 复制叉双向移动，DNA合成的单向延伸， 5’ 3’ Proteins and enzymes of DNA replication DNA helicase (DNA解旋酶) single-strand binding protein (SSB, 单链结合蛋白) DNA primase (DNA 引发酶) DNA topoisomerase (拓扑异构酶) Primosome (引发体) DNA polymerase (DNA聚合酶) DNA ligase (DNA 连接酶) DNA helicase (DNA解旋酶) Use the energy of ATP hydrolysis to move into and melt double-stranded DNA 利用ATP供能，解开DNA双链, 可随复制叉的伸展向前移动 大肠杆菌中解旋酶的种类 DNA primase (DNA 引发酶) Synthesizes a short RNA primer to initiate synthesis of DNA 在模板复制的起始部位，以DNA为模板催化互补碱基聚合生成一小段RNA e.g. DNa G (E. coli) DNA topoisomerase (拓扑异构酶) Regulate the level of supercoiling of DNA molecules 核酸外切酶活性 DNA ligase make the final phosphodiester bond between the fragments 连接DNA链3?-OH末端和相邻DNA链5?-P末端，形成磷酸二酯键，从而把两段相邻的DNA链连接成完整的链。反应需要ATP。 DNA复制的方式 1、θ型复制 2、滚环复制 3、D环复制 θ型复制 (Theta replication) 又称取代环复制。 双链在固定点解开进行复制，但两条链的合成高度不对称，一条链先复制，另一条链保持单链而被取代在电镜下看到呈英文字母D的形状。 又叫双螺旋稳定蛋白。 当解旋酶将双链打开以后，单链DNA具有一种潜在的恢复原来双链的能力，重新形成氢键。而且单链本身若有反向重复也会形成发夹结构，这两种情况都会影响复制的，但SSB可以解决这一问题。 SSB并不是酶，是由177个aa组成的蛋白，E. coli的SSB以四聚存在，分子量为74KDa，结合在单链上，使DNA受到保护，不被酶水解，也不回复成双链，因此可以降低DNA的Tm值。SSB对于细菌复制叉的结构的作用和解旋酶是同等的。 单链结合蛋白 single strand binding protein, SSB 岗崎片段（Okazaki fragment）： DNA复制时，一股以5’ 3’方向的母链作为模板，指导新合成的链沿5’ 3’合成1000—2000个核苷酸不连续的小片段称之为岗崎片段。 岗崎片段由DNA连接酶连成一条完整的新链。 1、对酵母、细菌以及几种生活在真核生