胞外酸化对大鼠关节软骨细胞焦亡的影响及可能机制-中国药理学通报.PDFVIP

中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０１６Ｎｏｖ；３２（１１）：１５３１～９ ·１５３１· 网络出版时间：２０１６－１０－２０１０：２９　网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０８６．Ｒ１０２９．０２２．ｈｔｍｌ 胞外酸化对大鼠关节软骨细胞焦亡的影响及可能机制 吴小山，陈飞虎，葛金芳，周仁鹏，祖胜芹，朱传君 （安徽医科大学药学院，安徽 合肥　２３００３２） ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１９７８．２０１６．１１．０１１ 同时，研究还发现促炎细胞因子 ＩＬ１、ＩＬ６、ＩＬ１８ β 文献标志码：Ａ 文章编号：１００１－１９７８（２０１６）１１－１５３１－０９ 等在ＲＡ关节软骨破坏和软骨细胞凋亡过程中起着 中国图书分类号：Ｒ３３２；Ｒ３２２．７２；Ｒ３２９．２５；Ｒ３９２．１２； ［３］ 至关重要的作用 。 Ｒ５９３２２ 　　细胞焦亡（ｐｙｒｏｐｔｏｓｉｓ）是在２００１年由Ｃｏｏｋｓｏｎ 摘要：目的　观察胞外酸化对大鼠关节软骨细胞焦亡的影 ［４］ 等 研究发现的一种炎症性程序性细胞死亡方式。 响，研究该过程中可能机制。方法　利用酶消化法获得原代 其典型特征为密切依赖于ｃａｓｐａｓｅ１／１１的激活，并 大鼠关节软骨细胞。软骨细胞分为不同ｐＨ处理组（ｐＨ ［５］ 伴随着大量促炎细胞因子 ＩＬ１、ＩＬ１８的释放 。 ７４、ｐＨ７０、ｐＨ６５和ｐＨ６０）以及ｐＨ６．０酸化不同时间组 β （０、６、１２、２４、４８ｈ），经ＲＯＳ还原剂ＮＡＣ预处理的酸化组和 细胞焦亡在细胞的形态学特征以及调控机制上均不 正常组，ＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ观察各组促炎细胞因 同于自噬、凋亡和坏死等细胞死亡方式。坏死的特 子ＩＬ１、ＩＬ１８和炎症小体组成成分ＡＳＣ、ＮＬＲＰ３、ｃａｓｐａｓｅ１ β 征包括细胞核破碎、溶解，细胞膜的通透性增加，细 基因和蛋白的表达情况，ＥＬＩＳＡ检测各组细胞培养基中的 胞内成分被释放到细胞外组织中，引起局部强烈炎 ＩＬ１、ＩＬ１８含量，ＡＯ／ＥＢ染色和 ＬＤＨ细胞毒性检测试剂 β 症反应。凋亡也是一种程序性细胞死亡过程，形态 盒分析细胞的死亡情况，ＲＯＳ测定试剂盒观察细胞内ＲＯＳ 学特征为细胞皱缩、核断裂，继而形成凋亡小体。由 荧光强弱。结果　与ｐＨ７４组比较，酸化组的促炎细胞因 于凋亡细胞细胞膜的完整性没有破坏，细胞内成分 子ＩＬ１、ＩＬ１８和炎症小体组成成分ＡＳＣ、ＮＬＲＰ３、ｃａｓｐａｓｅ１ β 没有被释放到细胞外，所以很少引起周围组织的炎 基因和蛋白的表达明显增加，荧光显微镜观察到ＲＯＳ荧光 明显增强，ＡＯ／ＥＢ染色和ＬＤＨ检测实验发现酸化可以诱导 症反应。研究表明，焦亡细胞在形态上同时具有凋 软骨细胞死亡，且ｐＨ６０酸化处理组效果最明显；ＲＯＳ还原 亡和坏死的特征，同时焦亡细胞的细胞膜也遭到破 剂ＮＡＣ预处理可以明显下调 ＩＬ１、ＩＬ１８、ＡＳＣ