观察光学显微镜样品制备.PPTVIP

显微技术;显微技术是微生物研究的一项重要技术;显微镜;大约在16世纪末，荷兰的眼镜商詹森（Zaccharias Janssen）和他的儿子把几块镜片放进了一个圆筒中，结果发现通过圆筒看到附近的物体出奇的大，这就是现在的显微镜和望远镜的前身。;荷兰人安东尼·冯·列文虎克（Anthony Von Leeuwenhoek ，1632-1723)制造的显微镜让人们大开眼界;;尼康E-600显微镜 ;显微镜的重要光学技术参数;显微镜的重要光学技术参数;显微镜的重要光学技术参数;四． 焦深焦深为焦点深度的简称，即在使用显微镜时，当焦点对准某一物体时，不仅位于该点平面上的各点都可以看清楚，而且在此平面的上下一定厚度内，也能看得清楚，这个清楚部分的厚度就是焦深。焦深大, 可以看到被检物体的全层，而焦深小，则只能看到被检物体的一薄层，焦深与其他技术参数有以下关系：1．焦深与总放大倍数及物镜的数值孔径成反比。2．焦深大，分辨率降低。 ;显微镜的重要光学技术参数;显微镜的重要光学技术参数;显微镜的重要光学技术参数;八、镜像亮度和视场亮度 镜像亮度（mirror-image brightness）是显微镜的图像亮度的简称，指在显微镜下观察到的景物的明暗程度。 视场亮度是指显微镜下整个视场的明暗程度，和镜像亮度是两个不同的概念。视场亮度不仅与目镜、物镜有关，它还直接受到聚光镜、光阑和光源等因素的影响。在不更换物镜和目镜的情况下，视场亮度大，镜像亮度也大。在观察和显微摄影时，更重要的是镜像亮度。;镜头的外表面上一般均标有各种光学参数，比如某物镜外标有“10/0.25”和“160/0.17”，它表示该物镜的放大倍数为10，数值孔径是0.25，机械筒长为160mm，要求的盖玻片厚度为0.17mm。;显微镜和显微技术;显微镜和显微技术; 普通显微镜结构示意图;显微镜和显微技术;显微镜和显微技术;酵母水浸片法录像（1:29）;活体观察难看到微生物的细致形态和结构，需染色观察。 染色前需要对样品固定，目的：杀死细菌使菌体黏附在玻片上；还可增加对染料的亲和力。 常用酒精火焰加热和化学固定两种方法 ;Negative staining is useful for capsules. Heat is required to drive a stain into endospores. Flagella staining requires a mordant to make the flagella wide enough to see.;革兰氏染色及镜检录象（5:24）;大肠杆菌革兰氏染色;光学显微镜的维护要点;暗视野显微镜（dark field microscope）;暗视野显微镜;暗视野显微镜的使用录像（2:17）;相差显微镜;相差显微镜（phasecontrast microscope）;相差显微镜的使用;相差显微镜的使用录像（3:20）;一种介壳虫的染色体;荧光显微镜;荧光显微镜和普通显微镜有以下的区别： ??? 1.照明方式通常为落射式，即光源通过物镜投射于样品上； ??? 2.光源为紫外光，波长较短，分辨力高于普通显微镜； ??? 3.有两个特殊的滤光片，光源前的用以滤除可见光，目镜和物镜之间的用于滤除紫外线，用以保护人目。;优点： 检出能力高 对细胞的刺激小 能进行多重染色 用途： 物体构造的观察 荧光的有无、色调比较进行物质判别 发荧光量的测定对物质定性、定量分析;显微镜和显微技术;铜绿假单胞菌和蜡样芽孢杆菌;共聚焦显微镜 （confocal microscope);激光共聚焦扫描显微境 LCSM （laser confocal scanning microscope);;Confocal Principle;数字共聚焦显微镜（digital confocal microscope);LCSM照片，蓝色为细胞核，绿色为微管，红色为色素颗粒;偏光显微镜（ Polarizing microscope ） 其光源前有偏振片（起偏器），使进入显微镜的光线为偏振光，镜筒中有检偏器（偏振方向与起偏器垂直）载物台可以旋转，当载物台上放入单折射的物质时，无论如何旋转载物台，由于两个偏振片是垂直的，显微镜里看不到光线，而放入双折射性物质时，由于光线通过这类物质时发生偏转，因此物镜便能检测到这种物体。 主要用途：用于检测具有双折射性的物质，如纤维丝、纺锤体、胶原、染色体等等;;偏 光 显 微 镜 下 的 岩 石;微分干涉显微镜（Differential interference contrast microscope ） 也是利用偏振光干涉原理成像。较相差显微镜，其标本可略厚一些，折射率差别更大