我的基因工程操作程序.pptVIP

* 原核细胞与真核细胞的基因结构比较 思考 编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？ 为什么要获得目的基因 为什么要把目的基因与载体结合 受体细胞是指什么?为什么要导入受体细胞 为什么要进行目的基因的检测 一、目的基因的获取 1、目的基因主要是指______________________ 编码蛋白质的基因 请举出三个以上的例子 如苏云金芽孢杆菌的抗虫基因，还有植物的抗病（抗病毒、抗细菌）基因、种子贮藏蛋白的基因，以及人的胰岛素基因、干扰素基因等。 一、目的基因的获取 2、获取目的基因的方法 1）构建基因文库，从中调用目的基因 2）利用PCR技术扩增目的基因 3）人工合成 1.什么是基因文库？ 2. 如何构建基因文库？ 3.如何从基因文库中调出目的基因？ 种类： 基因组文库： 部分基因文库： 编码区上游 编码区下游 RNA聚合 酶结合位点 RNA聚合 酶结合位点 编码 蛋白质 调控 调控 原核细胞 真核细胞 基因组文库的构建 将总DNA经过酶解，经电泳分离成不同长短的DNA片段并分别拼接在质粒或噬菌体载体上，转染细菌或体外包装到噬菌体颗粒上便构成了该生物的基因组文库。 部分基因文库的构建：如cDNA文库的构建 基因组文库与部分基因文库的区别 1.基因组文库是总DNA经限制酶随机酶切而成，有可能会破坏完整的基因；且含有内含子序列，以原核生物为载体构建该文库时，内含子序列是无法识别的，造成不能正确转录翻译。 2.反转录人工合成互补DNA获取 的DNA片段无内含子序列往往 可以直接作为具有特定功能 的目的基因 5/ 3/ G—G T—C 3/ 5/ G—A C—C 5/ 3/ 引物Ⅱ G—G 变性 复性 延伸 1.目的基因DNA受热变性，解链； 2.引物与单链互补结合； 3.合成链在DNA聚合酶作用下进行延伸。 5/ 3/ A—G 引物Ⅰ *