079-肝糖原的提取鉴定与定量实验报告.docVIP

生物化学实验报告 姓 名： 符含敏 学 号： 3140090079 专业年级： 2014级预防医学 组 别： 第三实验室 生物化学与分子生物学实验教学中心 实验名称 实验日期 实验地点 合作者 指导老师 评分 教师签名 批改日期 小四号，宋体，1.5倍行距数字、英文用Times New Roman； 实验原理：1.低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，使糖原能很好地保存在上清液中，95%的乙醇能将滤液中的糖原沉淀。 糖原溶液遇碘呈红棕色，糖原水解成的葡萄糖与班氏试剂水浴加热可变黑色。 糖原在浓酸中可水解为葡萄糖，浓硫酸可使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物，它再与蒽酮试剂脱水缩合生成蓝色的化合物。 糖含量在10-100μg，溶液颜色深浅与可溶性糖含量成正比。 实验材料：1.鸡肝 乙醇 5%三氯醋酸 50%NaOH 12mol/LHCl 碘试剂 班氏试剂 普通离心机 室温至100℃恒温箱 可见光分光光度计 天平 剪刀 镊子 研钵 试管架 10ml离心管 刻度吸量管 白瓷反应板 2. 30%KOH 标准葡萄糖溶液 90%浓硫酸 蒽酮显色剂 四．实验步骤： 1.肝糖原的提取与鉴定： 鸡肝约1.5 g，剪碎 ＋5%CCl3COOH 1 ml 研磨至乳状 ＋5%CCl3COOH 3 ml 研磨成肝匀浆 全部转入离心管中，离心3分钟（4000 r / min） 沉淀（弃去） 上清（取3 ml） ＋3ml 95%乙醇，混匀，静置10分钟 离心5分钟（4000 r / min） 上清（弃去） 沉淀 ＋蒸镏水1 ml 沸水浴2分钟，溶解沉淀 白瓷板孔穴中 糖原溶液1ml ＋浓HCl 5滴 加碘试剂2滴 加碘试剂2滴 沸水浴15分钟，冷却 糖原溶液2滴 ＋50%NaOH 5滴 呈色对比 糖原水解液2滴 糖原水解液 ＋班氏试剂4滴 混匀 沸水浴2分钟，观察变化 2.肝糖原的定量测定： 鸡肝0.15 g ＋30%KOH 1.5ml （用吸量管) 沸水浴15分钟 冷却，全部转入100 ml容量瓶中 加水至标线，仔细混匀，此为糖原提取液 糖原的测定 取3支试管，按下表操作: 试剂（ml） 空白管 标准管 样品管 标准葡萄糖溶液 — 1.0 — 糖原提取液 — — 1.0 0.2%蒽酮溶液 （用吸量管） 2.5 2.5 2.5 混匀，沸水浴10分钟，冷却c。在分光光度计620 nm波长处，用空白管溶液调零，测定各管溶液的吸光度（A）。 实验结果的记录与分析： 1. 所测吸光度值记录表 标准管 糖原提取液 吸光度值 0.693 0.763 肝糖原含量的计算： 肝糖原（g/100g肝组织）=0.763/0.693 ×0.05×100/0.12×0.1×1.11 =5.091 实验结果与预估值十分不符 3.实验过程中的主要图片：