壳聚糖固定化海洋微生物ys2071脂肪酶及其酶学性质-渔业科学进展.pdfVIP

第36 卷 第 6 期 渔 业 科 学 进 展 Vol.36, No.6 2 0 1 5 年 1 2 月 PROGRESS IN FISHERY SCIENCES Dec., 2015 DOI: 10.11758/yykxjz / 壳聚糖固定化海洋微生物YS2071 脂肪酶 及其酶学性质* 1,2 1 1 1 1① 张 权 盛 军 刘均忠 郑鸿飞 孙 谧 (1. 农业部海洋渔业可持续发展重点实验室 中国水产科学研究院黄海水产研究所 青岛 266071 ； 2. 上海海洋大学食品学院 上海 201306) 摘要 采用壳聚糖为载体，优化了海洋微生物YS2071 脂肪酶的壳聚糖固定化条件。结果显示， 在壳聚糖浓度为2% (m/v) 、氢氧化钠浓度为12% (m/v) 、乙酸浓度为1% (v/v)、戊二醛浓度为0.25% (v/v) 、与戊二醛交联的时间为12 h 及添加2 ml (1120 U) 的游离脂肪酶时，固定化脂肪酶的活力最高， 其活力回收率达到69.4%。对游离脂肪酶与固定化脂肪酶的酶学性质进行比较，结果显示，游离脂 肪酶的最适反应温度为40 ℃，而固定化脂肪酶的最适反应温度为45 ℃，固定化脂肪酶的温度稳定 性明显优于游离脂肪酶。最适反应pH 均为 8.0 ，脂肪酶经过固定化之后，酸碱耐受性增大。重复 利用10 次的固定化脂肪酶的酶活力保留率仍高于65%。固定化脂肪酶贮藏半衰期为96 d ，而游离 脂肪酶的贮藏半衰期是33 d。固定化脂肪酶与游离脂肪酶的酶活力保留率在不同有机试剂中表现出 不同的稳定性。 关键词 壳聚糖；海洋微生物脂肪酶；固定化；酶学性质 中图分类号 S917 文献标识码 A 文章编号 2095-9869(2015)06-0100-07 脂肪酶(Lipase, EC )是一类特殊的酯键水 液有良好的成胶性，是一种性能优良的固定化载体 解酶，作用于羧酸酯的酯键，能够水解甘油三酯、甘 (王金瑾等, 2009; Krajewska, 2004; Taqieddin et al, 油二酯和甘油单酯，并称为三酰甘油酰基水解酶 2004) 。本研究选取壳聚糖为固定化脂肪酶的载体， (Jaeger et al, 2002) 。脂肪酶因其多功能性，在工业、 对固定化的条件进行了优化，同时对固定化脂肪酶的 农业以及医学等领域具有广泛的用途，应用于食品、 酶学性质进行研究，为以后脂肪酶的应用奠定基础。 医药、皮革、纺织、精细化工等工业生产中(王庭等, 2010; 刘海洲等, 2008; 宋欣等, 1999; 姚庆龙等, 1 材料与方法 2006; 王智等, 2003) 。但是，游离脂肪酶的温度稳定 1.1 材料、试剂及主要仪器 性、酸碱耐受性以及在有机试剂中的稳定性较差。在 工业生产应用中，游离的脂肪酶无法与产物分离，同 脂肪酶为从黄海中筛选的一株海洋细菌 YS2071 时不能回收利用。因此，采用壳聚糖固定化脂肪酶， 所产。壳聚糖、对硝基苯基月桂酸酯(4-Nitrophenyl 不仅保证酶的高效性，还可以克服游离脂肪酶的一些 dodecanoate)购自Sigma ，异丙醇、考马斯亮蓝G-250、 缺点(Chua et al, 2004) 。 Triton X-100、Na HPO 、NaH PO 、戊二醛购自国药集 2 4 2 4 壳聚糖是一类生物界中来源广泛且具有生物相 团化学试剂