细胞学第6章B中.pptVIP

确定内部启动子的实验;?原核生物rRNA基因 ◆原核与真核生物的rRNA基因在组织结构上的差异: ●重复频率：如E.coli，只重复了7次； ●细菌的16S rRNA 、23S rRNA 、5S rRNA基因组成一个转录单位，在染色体上的排列顺序是∶16S-23S-5S。;原核生物rRNA前体的加工;6.2.2 核糖体的装配;核糖体RNA的位置关系; 核糖体在组装过程中,某些蛋白质必须首先结合到rRNA上,其他蛋白才能组长上去即表现出先后层次。根据同rRNA结合的顺序,将核糖体蛋白分为两种:;◆初级结合蛋白(primary binding protein) 这些蛋白质直接同rRNA结合, 其中同16S rRNA结合的初级蛋白有14种: S3, S4, S17, S20, S6, S15, S8, S18, S9, S11, S12, S13, S7, S1。 同5S rRNA结合的有11种。 ◆次级结合蛋白(secondary binding protein) 这些蛋白质不直接同rRNA结合, 而是同初级结合蛋结合:S10, S16, S2, S6, S21, S14, S19。;核糖体蛋白空间定位;?真核生物核糖体装配??型;核糖体的合成与装配;6.3 核糖体的功能;核糖体的功能位点;真核与原核mRNA的差异;SD(Shine-Delgarno) sequence;蛋白质合成中各位点的协同性;多聚核糖体;嘌呤霉素对蛋白质合成的抑制作用;嘌呤霉素对蛋白质合成的抑制作用;6.4 Ribozyme and  Antisense RNA;6.4.1 真核细胞中的小分子RNA(small RNA);?scRNA(small cytoplasmic RNA): ?snRNA(small nuclear RNA)： ◆snRNPs(small nuclear ribonucleoproteins)颗粒； ●一个snRNA, ～10个蛋白质; ●有些蛋白质是某一snRNP所特有，有些则是各种snRNP所共有； ◆ snRNPs分类: 由于snRNA富含脲嘧啶核苷，分类时把它分为U1、U2、……等。; 6.4.2 Antisense RNA;6.4.3 Ribozyme;核酶的作用;?核酶的发现 ◆几个基本概念 ●间隔序列(space sequence) ●内含子(intron) ●外显子(exon);卵清蛋白前体mRNA的加工;◆发现 ●1980s ●Thomas Cech等 ●研究四膜虫的26SrRNA前体加工 ●发现:26S rRNA前体可进行自剪切 (self- splicing) ◆证明 ●26SrRNA基因克隆 ●无细胞系统中转录 ●研究26S rRNA的前体分子剪切;rRNA前体的自剪接;?50S核糖体中23S rRNA核酶活性 ◆起因:肽酰转移酶(peptidyl transferase) ◆发现者: Harry Noller等,1992年 ◆实验过程: ●破坏50S亚基核糖体蛋白质 蛋白酶K、SDS、苯酚等 ●破坏rRNA 核酸??处理50S亚基核糖体 ●抑制蛋白质合成 用抑制剂处理 ◆结论: 具有肽酰转移酶的活性分子是23SrRNA。;6.4.3 核酶; ;RNA剪接的三种途径;◆核剪接(nuclear splicing) ●即从pre-mRNA中切除内含子 ●剪接发生在细胞核中 ●加工成熟的mRNA被运送到细胞 质。;mRNA合成、加工与运输;真核生物mRNA的输出;◆Nuclear splicing Mechanisms ●GU-AG rule； ●Spliceosomes : Composed of proteins and RNAs. The RNA components of the spliceosome are five types of small nuclear RNAs (snRNAs) called U1, U2, U4, U5, and U6. ●Lariat-like structure 。 ;核剪接;GU-AG rule;◆Group I intron splicing ●结构特点: 内含子转录后可以形成9个由碱基 配对形成的特定二级结构, 分别命 名为P1至P9, P1和P7是保守的。 ●需要游离的鸟苷 ●存在的细胞器:核、线粒体、叶绿体 ●基因:前体rRNA、mRNA和tRNA;◆Group I intron splicing;◆Group II intron splicing ●结构特点: 内含子转录后可以形