高通量筛选的原理及其实践.pdfVIP

2000／11／22—23 ’2000率罾农药技术镪羲论珐 广东·珠海 高通量筛选的原理及其实践 张宗俭 李斌 秦宵然 (沈阳化工研究院) 1前言 农药和医药的开发、应用及其整个发展与其检测这些化合物活性的生物测定技术的有 效设计和应用密切相关。在七十年代以前的近半个世纪，医药的创新与发展与活体动物测 试筛选模型的建立和应用是难以区分的，这种模式和思维也被农药的研究所采纳。依赖于 这种生物测定试验的传统新药物发现和创制发展较慢，并且一直与新型作用靶标的发现和 应用相关联。其创新的能力则与人员、试验条件、筛选模型及方法、合成和先导设计能力等 有关，耗资巨大。 七十年代以后，由于生物化学、分子生物学和计算机与自动化技术的发展和应用。以酶 和受体为主，兼容其他一些可以微型化的生物靶标的高通量筛选技术逐步形成并被应用于 医药创制研究之中。九十年代以来，由于高通量筛选技术在医药领域的巨大成功，从事农药 创制的大型公司也纷纷筹备并建立了高通量筛选体系。目前，高通量筛选研究已经成为医 药和农药创新研究中发现和优化新型先导化合物的一项重要手段。我国的农药创制部门也 积极进行高通量筛选技术的探索，估计在以后的几年以内，适合我国国情的高通量筛选技 术的建立和应用将成为推动我国新农药技术创新水平和提高我国农药研究在国际上竞争 力的一个重要举措。 2高通量筛选技术的产生和基本概念 进入70年代后，医学治疗、诊断等研究领域中对酶和受体的研究取得了重大突破，从 而给设计以酶和受体为靶标的筛选模型，进行药物的微量筛选提供了可能，生物化学家开 始介入工业化创制研究。但由于当时研究的局限性以及酶、受体和天然抑制剂的分离、纯化 难度较大，新的测试模型很难应用于工业化大规模筛选研究。80年代后，随着生命科学的 Put 迅速发展和自动化、计算机等技术的发展与普及，高通量筛选(Hi小一throughScreening， HTS)逐步建立并被用于新医药的前期筛选研究之中。早期高通量筛选技术主要是将现有 各种筛选技术与自动化技术相结合，同时进行多种不同类型的生物活性评价。在其建立并 投入应用的近10年以来，因其高效、快速、节省人员、时间和合成费用，并且数据反馈及时 准确等优点很快取得成功并被广泛采用。进入90年代中期以来，许多农药公司也借鉴医药 创新的经验，建立了适合于农药创新的高通量筛选体系。 高通量筛选目前已经成为创制医药和农药机构对大量天然产物和组合化学技术合成 的化合物等进行快速筛选和进行先导化合物创新的重要手段。概括地讲，它是一项将现有 的各种筛选测试技术与自动化技术有机地结合起来，集化学、生物学、生物化学、基因工程、 机器人(智能化与自动化)、计算机技术、数据处理系统等于一身的高新技术。其最高筛选能 力达到每周数万个化合物以上。作为一个智能化的动态快速筛选系统，它不仅融合了传统 离体或活体筛选模型)并增加了传统方法所无法观察和鉴别的不同作用位点的微量筛选技 术。根据其发展需要，专一从事高通量筛选的多学科研究的科学家可不断发现并建立新的 ’2000率国农药技术秘耨{宅坛 2000／11／22—23广东·璩海 酶或受体反应测试等高通量筛选的新方法。同时，根据发展和研究需要对筛选系统可以进 行调整和更新。对其试验人员也应不断进行高通量筛选理论和操作技能训练。为创制新的 高效化合物开辟新途径。 3高通量筛选技术的组成 典型的高通量筛选体系由以下几个方面组成：1)、大型的结构多样性化合物库的建设； 2)、快速检测技术的建立与应用；3)、自动化和机器人技术的开发和应用；4)数据库的建立 和数据采集、处理、查询与交流系统等。其中化合物库的组建有天然产物源化合物、购买化 筛选化合物)、利用组合化学技术设计合成以及传统台成与库存等。大量的待选化合物是高 通量筛选技术的先决条件和数据库建立的支撑基础，而化合物的多样性和筛选靶标的数量 与代表性决定先导化合物发现的成功率。靶标(酶、受体、细胞、器官、组织、微型生物体等)、 测试技术和快速检测方