猪il－2基因在毕赤酵母中的高效表达及生物活性分析-畜牧兽医学报.pdfVIP

畜牧兽医学报 ， （）： ２０１１４２４ ５５１５５６ 　 － ＡｃｔａＶｅｔｅｒｉｎａｒｉａｅｔＺｏｏｔｅｃｈｎｉｃａＳｉｎｉｃａ 　 　 　 　 猪 基因在毕赤酵母 中的高效表达 ＩＬ２ － 及 生物活性分析 ， ， ， ， ， 陈国华 贾怀杰 曾 爽 房 永祥 李 小庆 　 ＊ ＊ ， 景 志忠 才 学鹏 （ ， ， 中国农业科 学院兰 州兽医 研究所 家畜疫 病病原 生物学国家重点实验室 ， ， ） 农业部兽医 公 共 卫 生重点实验室 甘肃 省 动物 寄生 虫 病 重点实验室 兰州 ７３００４６ ： ， ， 摘 要 本 研究 根据 密码 子偏爱 原 则设计 猪 引物 克 隆其 基因后 构 建 重 组 表达 载体 线 性 化 后 电 ＩＬ２ ＰＩＣ９ｋＩＬ２ 　 － ｐ － － ， ； ， 转 化 毕 赤 酵母 ＧＳ１１５ 获得 优 化 密码 子 的重组 酵母 转 化子 再 用 Ｇ４１８抗性 梯 度 法 筛 选 得 到 多 拷 贝 重 组 菌 株 不 同 。 ： 。 条件 下 进行 甲醇诱导表达 结 果 表 明 经 鉴 定 基因 已整合 到 酵 母 基因 组 中 表达 产物 经 电 ＰＣＲ ＩＬ２ ＳＤＳＰＡＧＥ － － 、 ， 泳分 析 发现 相 对 分子 质 量为 两 条 目的蛋 白 表 达 带 脱 糖 基 化 分 析 表 明 目的蛋 白 得 到 了适 度 的糖 基 化 修 １６２０ｋｕ ， ， ， 饰 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎ 分 析显示 表达 的蛋白具 有 良好 的免 疫 反 应 性 分 子 筛 纯 化 可 以 获 得 纯 度 为 ９５％的蛋 白 质 淋 　 ｇ 巴细胞增 殖 活性分 析 表 明所 得 的蛋白质 具 有 促 淋巴 细 胞 增 殖 的 活 性 。毕 赤 酵 母 表 达 系 统 可 以 高 效 地 表 达 具 有 生 物活性的重组 猪 蛋